遺伝子導入ハエを用いたDREFの機能解析

使用转基因果蝇进行 DREF 功能分析

• 批准号: 12028242
• 负责人: 廣瀬 富美子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028242/
• 关键词: 転写因子; クロマチンリモデリング因子; ショウジョウバエ; Mi-2

ショウジョウバエを用いたdDREFとの相互作用因子の同定(1)ショウジョウバエの複眼でのdDREFを強制発現により起こる形態異常を増強あるいは緩和するP-エレメント挿入変異体ハエをスクリーニングし、DREFと遺伝学的に相互作用する遺伝子を20系統を単離した。P-エレメントレスキュー法を行い得られた遺伝子断片の塩基配列を決定し、E2F,RF-C,string,stonewall遺伝子を同定した。また、Polycombやtrithraxグループに属するいくつかの因子がdDREFと遺伝学的に相互作用することを見い出した。(2)酵母のtwo hybrid screening法で検索したdDREFと結合する因子のうち、MLF(myeloid leukemia factor)のショウジョウバエホモログ(dMLF)のcDNAクローンを得た。pull down法による相互作用を証明するとともに、dMLFの機能解析に着手した。ヒトDREFを用いたtwo hybrid screeningによるDREF相互作用因子の同定(1)dDREFのヒトホモログ(hDREF)をbaitに用いたyeast two hybrid screenにより、これと相互作用する因子のcDNAを単離し、その中のひとつが、クロマチンリモデリング因子として知られるMi-2α(ATP依存性ヘリカーゼ)であった。生化学的方法や免疫学的手法により両者が直接直接結合することを証明した。(2)ショウジョウバエのMi-2(dMi-2)とdDREFが結合することも証明し、両者の結合に関わる領域も決定した。(3)遺伝学的な方法を用いたいくつかの実験により、ショウジョウバエDREFはdMi-2により抑制的な制御を受けている可能性を示唆した。(4)dMi-2はdDREFのDNA結合活性を阻害することをgel mobility shift assayなどにより証明した。

The interaction factors of dDREF and DREF in the compound eye of the plant were determined.(1) The stress generation of dDREF in the compound eye of the plant caused the morphological abnormality to increase, and the relaxation of the morphological abnormality caused by dDREF and DREF in the compound eye caused the separation of 20 systems. P-C,string,stonewall, etc. Polycomb and trithrax are the most important factors in the interaction between dDREF and genetics. (2)The two hybrid screening method of yeast was used to detect the cDNA sequence of dDREF and MLF(myeloid leukemia factor). Pull down method to prove the interaction between the two, dMLF function analysis DREF interaction factor identity (1)dDREF interaction factor identity (hDREF) baits in yeast two hybrid screen identity, the interaction factor cDNA identity, and the interaction factor Mi-2α(ATP dependence). The biochemical method and the immunological method are directly combined. (2)The domain of Mi-2(dMi-2) and dDREF is determined by the domain of Mi-2(dMi-2). (3)The method of genetic engineering is used to show the possibility of inhibiting the growth of DMi-2. (4) The DNA binding activity of dMi-2 was inhibited by gel mobility shift assay.

项目成果

Ohshige,M. et al.: "Molecular cloning and expression during development of the Drosophila gene for the catalytic subunit of DNA Polymerase E."Gene. 256. 93-100 (2000)

大重，M.

Kwon E-J, et al.: "Transcriptional regulation of the Drosophila raf Proto-oncogene by Drosophila STAT during development and in immune response"J.Biol.Chem.. 275. 19824-19830 (2000)

Kwon E-J 等人：“果蝇 STAT 在发育和免疫反应过程中对果蝇 raf 原癌基因的转录调节”J.Biol.Chem.. 275. 19824-19830 (2000)

Ohno,K. et.al.: "Characterization of a Drosophila homologue of the human myeloidysplasia/myeloid leukemia factor (MLF), isolated as a..."Gene. 260. 133-143 (2000)

大野，K.

Hirose,F. et al.: "Targeted expression of the DNA-binding domain of DRE-binding factor, a Drosophila transcription factor attenuates DNA replication of the Salivary..."Mol.Cell.Biol.. 19. 6020-6028 (1999)

广濑，F.

Yamaguchi,M. et al.: "Ectopic expression of human p53 inhibits entry into S-phase and induces apoptosis in the Drosophila eye imaginal disc"Oncogene. 18. 6767-6775 (1999)

山口，M.