分子整形技術を用いたRNAの動的構造-機能相関の研究

利用分子整形技术研究RNA的动态结构-功能关系

• 批准号: 09278214
• 负责人: 西川 一八
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278214/
• 关键词: 蛍光プローブ; tRNA高次構造; 分子整形技術

本研究は、極微量にしか得られないRNAの高次構造変化を追跡するために低分子RNA内部の特定部位に蛍光プローブや光で駆動される架橋性官能基等の「分子レポーター」を導入する方法を開発することを目指している。本年度得られた成果は以下の通りである。1.分子整形術による「分子レポーター」導入のモデルRNAとして酵母tRNA^<Tyr>を取り上げ、その遺伝子を大腸菌菌体内で大量発現させる系を構築することにより精製酵母tRNA標品の大量調製が可能となった。このtRNAを各種RNaseにより限定分解してD-ループ、アンチコドンループ、T-ループ内で切断されたRNA断片を効率よく調整する条件を確立した。2.RNAリガーゼ反応のドナー基質となり得る3'.5'-ヌクレオシド二リン酸体プローブモノマーとして独自にビチオン化pCpを調製し、また同様のモノマー_<ps>_4Upを東工大の関根光雄教授から提供を受け、それらをアクセプターRNA断片に連結させる反応の至適条件を検討した。3.さらに同様の目的に使用し得るプローブモノマーとしてN^6-(6-アミノヘキシル)アデノシン3'.5'-二リン酸が市販品として入手可能であることがわかったので、このヌクレオチドをまずRNAの「希望の」位置に導入しておき、RNA分子を再構築後このヌクレオチドの6-アミノヘキシル基をターゲットにFITC等の一級アミン修飾蛍光化剤で蛍光プローブを導入するルートについても検討を始めた。小スケールの予備的実験では、アンチコドンループ内の特定個所にフルオレッセイン基を持つtRNA^<Tyr>の再構築に成功している。

In this study, we developed a method for introducing molecular molecules such as bridging functional groups into specific sites of low-molecular RNA by tracing high-order structural changes of RNA. This year's achievements are as follows: 1. Molecular reshaping technology for the introduction of yeast tRNA and the construction of a system for the production of large quantities of yeast <Tyr>tRNA in Escherichia coli The RNA fragments were isolated from the RNA fragments by restriction enzyme D-RNA, D-RNA and T-RNA. 2. <ps>To study the optimal conditions for RNA fragments to be linked by RNA fragments, Professor Mitsuo Sekine of Tokyo University of Technology proposed to modulate RNA fragments independently. 3. For the same purpose, the user can choose to use the same method.(6-Dimethylphenol)-Dimethylphenol-3'.5'-Dimethylphenol-3'.5' Dimethylphenol-3 'Dimethylphenol-3'.5 'Dimethylphenol-3'.5 'Dimethylphenol-3' Dimethylphenol-3 After RNA molecule reconstruction, the 6-amino acid group was introduced into the 6-amino acid group, such as FITC, and the first amino acid group was introduced into the 6-amino acid group The <Tyr>preparation of small groups was successful in the reconstruction of specific groups in the group.

项目成果

H.Himeno et al.: "Only one nuleotide insertion to the long variable arm confers an efficient serine acceptor activity upon Saccharomyces cerevisiae tRNA^<Leu> in vitro" J.Mol.Biol. 268. 704-711 (1997)

H.Himeno 等人：“长可变臂中仅插入一个核苷酸即可在体外对酿酒酵母 tRNA^<Leu> 赋予有效的丝氨酸受体活性”J.Mol.Biol。

I.Hayashi et al.: "Assignment of Imino Ptoton Signals of G-C Base Pairs and Magneesium Ion Binding:An NMR Study of Bovine Mitochondrial tRNA^<Ser> GCU Lacking the Entire D Arm." J.Biochem.121. 1115-1122 (1997)

I.Hayashi 等人：“G-C 碱基对和镁离子结合的亚氨基 Ptoton 信号的分配：缺乏整个 D 臂的牛线粒体 tRNA^<Ser> GCU 的 NMR 研究。”

Y.-i.Watanabe et al.: "Primary sequence of mitochondrial tRNA^<Arg> of a nematode Ascaris suum:occurence of unmodified adenosine at the position of the anticodon." Biochim.Biophys.Acta. 1350. 119-122 (1997)

Y.-i.Watanabe 等人：“猪蛔虫线粒体 tRNA^<Arg> 的一级序列：反密码子位置出现未修饰的腺苷。”