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分子整形技術を用いたRNAの動的機能-構造相関の研究

利用分子整形技术研究RNA动态功能结构关系

基本信息

批准号：
10174214
负责人：
西川一八
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174214/
关键词：
蛍光プローブ分子整形技術 RNA構造-機能相関 tRNA高次構造

项目摘要

本研究は、極微量のRNAの高次構造変化を追跡するためにRNAの特定部位に蛍光プローブや光化学反応性官能基等の「分子レポーター」を導入する方法の開発を目指している。今年度の成果は以下の通りである。 (1)分子整形術による「分子レポーター」導入のモデルRNAとして酵母tRNA^<Tyr>,tRNA^<Ile>およびtRNA^<Ala>を取り上げ、これらのtRNAを適切な「保護DNA断片」共存下に酵素で限定分解することによりD-ループ、アンチコドンループ、T-ループ内でそれぞれ切断されたRNA断片を効率よく調製する条件を確立した。 (2)RNAリガーゼ反応のドナー基質となり得るプローブ単量体として、独自にフルオレセイン化pCpやフルオレセイン化N^6-(6-アミノヘキシル)pAp等の調製法を開発し、また同様のモノマーps^4Upを東工大の関根光雄助教授から提供を受け、それらをアクセプターRNA断片に連結させる反応の至適条件を検討した。 (3)上記1.および2.の組み合わせにより、分子内の各所にフルオレセイン標識ヌクレオチドを組み込んだtRNAを各種作製した。 (4)フルオレセインで蛍光標識されたtRNAとタンパク質合成諸因子(ペプチド鎖伸長因子EF-Tuなど)との相互作用を蛍光偏光解消法を用いて測定するための基礎的研究を行った。アンチコドンループ2文字目をフルオレセイン化したtRNA^<Ala>をアラニル-tRNA合成酵素によりアミノアシル化し、さらにそれがEF-TuおよびGTPと三重複合体を形成する過程を蛍光偏光解消法により追跡することに成功した。今後この系を利用して、各種変異tRNAとタンパク質合成諸因子との相互作用を定量的に解析したい。

In this study, the high-order structure modification of extremely small amounts of RNA was traced to the specific parts of RNA and the light was detected.ーブやPhotochemically reactive functional groups, etc. "Molecular レポーター" をIntroduction method の开発をObject refers to している. The results of this year are as follows. (1) Molecular Plastic Surgery "Molecular Plastic Surgery" introduces yeast tRNA into the yeast tRNA^<T yr>,tRNA^<Ile>およびtRNA^<Ala>をtakeり上げ、これらのtRNAをThe limited decomposition of enzymes under the coexistence of appropriate "protective DNA fragments" D-ループ, アンチコドンループ, T-ループ内でそれぞれ cutting されたRNA fragmentation をefficiency よくmodulation するconditions をestablishment した. (2)RNA リガーゼ Reflection のドナー matrix となり got るプローブ単体として, Dokki にフルオレセイン化pCpやフルオレセイン化N^6-(6-アミノヘキシル)pAp etc. Modulation methodを开発し、また同様のモノマーps^4UpをAssistant Professor Mitsuo Sekine of Tokyo Institute of Technology Provide を receive け, それらをアクセプター RNA fragment に connection させる reaction 応の to the appropriate conditions を検した. (3) Above mentioned 1.および2.の集团み合わせにより, molecule intramolecular no kakusho にフルオレセイン logo ヌクレオチドをgroup み込んだtRNAをvarious production した. (4) フルオレセインで蛍Light-labeled tRNA tRNA とタンパク plasmid synthesis factors (ペプチド lock elongation factor EF-Tuなど)とのInteractionを蛍Light polarization elimination method and the basic research on the determination of するための using いてを行った.アンチコドンループ2 subtitles をフルオレセイン化したtRNA^<Ala>をアラニル-tRNA synthesis enzyme によりアミノアシThe formation process of the ル化し、さらにそれEF-TuおよびGTPとtriplex complex was successfully followed by the polarization elimination method of light. In the future, we will use various tRNA and various different tRNA materials to synthesize various factors and analyze their interactions quantitatively.