大腸菌機能未知GTP結合タンパク質の構造・機能相関

功能未知的大肠杆菌 GTP 结合蛋白的结构-功能关系

• 批准号: 03F00166
• 负责人: 西川 一八
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00166/
• 关键词: 機能未知遺伝子; GTP結合タンパク質; 相互作用; アフィニティーカラム; ERA; MnmE; YchF; YihA

ゲノム情報が蓄積するに従って、バクテリアの遺伝子の中には、高度に保存されていながら機能が不明のGTP結合タンパク質遺伝子群が存在していることが明らかとなってきた。これらの機能を明らかにする目的で、大腸菌のERA,mnmE,lepA,yihA,ychF,yhbZとengAの各遺伝子を発現ベクターpET21aにクローニングした。このうちMnmEタンパク質をHis-tag融合タンパク質として発現させた。MnmEタンパク質はtRNAのアンチコドン1文字目の修節への関与が示唆されているが、その詳細は不明である。そこで、同じ修飾への関与が示唆されているGidAタンパク質との相互作用をnativeアガロースゲル電気泳動により観察したところ、両者が複合体を形成することが明らかとなった。今後、tRNAとの相互作用が見られるかどうかを解析していく予定である。また、タンパク質相互作用を検出する一手法として、His-tag融合MnmEタンパク質をNi-NTAアガロースに結合させ、これをMnmE固定化樹脂に早立てたアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより、樹脂に吸着するタンパク質群を大腸菌細胞抽出液から回収した。これらについては、ペプチドマスフィンガープリント法によりタンパク質を同定した。現在、同定されたタンパク質とMnmEが実際に相互作用するかどうかを検定している。また同様の実験を他のGTP結合タンパク質についても行うことで、これら機能未知GTP結合タンパク質の機能に迫りたいと考えている。

The information is stored in the middle and high levels of the GTP binding domain, and the GTP binding domain is stored in the middle and high levels of the GTP binding domain. The purpose of this function is to identify the development of each gene of Escherichia coli ERA,mnmE,lepA,yihA,ychF,yhbZ and engA. This is the case with His-tag fusion. MnmE is the most important part of the text, and the most important part is the most important part of the text. The interaction between the two molecules is a natural phenomenon, and the interaction between the two molecules is a complex phenomenon. From now on, tRNA interactions will be resolved. A method for detecting the interaction between MnE and NTA by His-tag fusion is described. The MnE immobilized resin is prepared by adsorption of NTA on the resin. The quality of the product is the same as the quality of the product. Now, the same is true of the interaction between the two. The same is true for other GTP binding agents. The function of the agent is unknown.