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微小管滑り運動に伴うダイニンの構造変化の同定および可視化

与微管滑动运动相关的动力蛋白结构变化的识别和可视化

基本信息

批准号：
09279211
负责人：
稲葉一男
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

微小管系モータータンパク質であるダイニンは分子量が約50万と巨大な分子である。近年遺伝子クローニングによりその分子の一次構造が明らかになったが、ATP分解によりどのような構造変化が起こり微小管の滑り運動に結び付くかは依然不明である。本研究ではトリプシンによって切断される部位がATP/Vi存在下、非存在下で異なることを利用して、ATP分解に伴うダイニンの構造変化部位を同定した。その結果、全体として見ればダイニンβ重鎖の4個のP-ループ(ATP結合部位)の近傍が構造変化を受けるが、その範囲は極めて広くβ重鎖の約半分の領域(2077アミノ酸)に及ぶことが明らかになった。またP1-loopの近くに存在する構造変化部位(TAV1 site)からC末端側の領域でクラミドモナス軸糸ダイニンや細胞質ダイニンと90%以上のidentityを有する高度に保存された領域が存在することも明らかになった。さらに、他のTAV領域については領域によってダイニン一般に高く保存されている領域、軸糸ダイニンのみで保存されている領域、保存性は特に高くない領域等が存在することがわかり、個々のダイニン固有の機能を反映しているものと思われる。実際の微小管滑り運動時にみられるダイニンのATP加水分解に伴う構造変化を可視化することを目的として、各TAV部位近傍の約20アミノ酸配列に対するペプチド抗体を作製したが、これらはすべてダイニンヘの結合性、ATPase阻害能、鞭毛運動阻害能を欠いていた。lgGよりもさらに低分子化されており、また遺伝子操作によりさまざまな分子改変が可能な組換えファージ抗体の作製を現在試みている。

Tiny tubes have a molecular weight of about 500,000 and giant molecules. In recent years, the primary structure of the molecule is still unknown, and the ATP decomposition is still unknown. In this study, the structural transformation sites of ATP decomposition and ATP decomposition were determined in the presence and absence of ATP/Vi. The results show that the four P-sites of β-relocationsare closely related to the structure of ATP binding sites, and the two regions of β-relocationare closely related to the structure of ATP binding sites. The structural transformation site (TAV1 site) near the P1-loop exists, and the domain on the C-terminal side is highly preserved. In addition, in other TAV fields, there are areas where the average quality of the equipment is generally high, areas where the core quality of the equipment is high, and areas where the quality of the equipment is high. This makes it possible to reflect the inherent functions of each individual equipment. In fact, the ATP hydrolysis in micro-tubes is accompanied by structural change visualization, and about 20 minutes of acid alignment near each TAV site is accompanied by antibody control. The binding property, ATPase resistance and flagellar movement resistance of micro-tubes are insufficient. The molecular modification of the low molecular weight protein and the molecular modification of the low molecular weight protein and the molecular modification of the low molecular weight protein and the molecular modification of the low molecular weight protein are studied.