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タンパク質リン酸化による精子運動の分子制御機構の研究

蛋白质磷酸化调控精子活力的分子机制研究

基本信息

批准号：
00F00179
负责人：
稲葉一男
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,精子運動の分子調節機構を解明するために、原索動物カタユウレイボヤを用いて、特に(1)運動調節に必須な内腕中間鎖の同定とその機能解明、及び(2)新規カルシウム結合蛋白質の同定と軸糸内局在/機能の解析を行った。まず、内腕中間鎖については、クラミドモナス中間鎖IC140と相同性を示すものをホヤ精巣ESTデータベースから検索し、RACEによる全長cDNA配列の決定、発現蛋白質に対する抗体の作製、局在の決定、運動活性化前後における変化について調べた。その結果、ホヤ精子軸糸の中間鎖は、クラミドモナスよりもサイズの小さい116kDaであり、同様に内腕に局在することが明らかになった。また、二次元電気泳動による解析の結果、精子活性化物質SAAFの添加により精子が活性化される際に116kDa中間鎖が脱リン酸化されることが明らかになった。一方、抗軸糸血清を用いた精巣cDNAライブラリーのイムノスクリーニングにより、カルシニューリンBサブユニットと相同性を持つ新規の25kDaカルシウム結合蛋白質のクローンを複数単離することができた。抗体を用いた実験の結果、この蛋白質は軸糸から0.6M KCl抽出で可溶化されることがわかった。さらに、免疫電顕により、軸糸の外腕付近に局在することがわかった。0.6M KCl抽出画分をゲル濾過により分離すると25kDaカルシウム結合蛋白質は複合体として単離されてきた。二価性架橋試薬EDCを用いた架橋実験により、25kDaカルシウム結合蛋白質が、45kDaの蛋白質と複合体を作っていることが明らかになった。

This study aims to elucidate the molecular regulatory mechanisms of sperm motility, the role of protozoa in sperm motility, in particular (1) the functional elucidation of the homeostasis of the interlocks necessary for motility regulation, and (2) the functional elucidation of the homeostasis of the novel cytokinin binding proteins. The determination of full-length cDNA alignment, antibody production, site determination, and regulation before and after exercise activation were performed in the determination of the identity of IC140 and IC140. The result is that the sperm axis is locked in the middle, and the sperm axis is locked in the middle. Results of analysis of secondary electromigration, addition of sperm activating substance SAAF, and deacidification of 116kDa intermediate chain A new 25kDa protein binding protein is identified by the identity of the anti-axis serum. The results of antibody use showed that the protein was solubilized by 0.6M KCl. In addition, the immune system can be used to prevent the occurrence of diseases. 0.6M KCl extract was filtered to isolate the 25kDa protein binding complex. The 25kDa protein complex binds to the 25kDa protein complex, and the 45kDa protein complex binds to the 25 kDa protein complex.