权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

部位特異的組換えファージ抗体を用いたダイニンの動的構造の解析

使用位点特异性重组噬菌体抗体分析动力蛋白的动态结构

基本信息

批准号：
10175207
负责人：
稲葉一男
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ダイニンは巨大な微小管系のモータータンパク質である。ダイニンはATPを加水分解する際に大きな構造変化を起こすが、この変化はダイニンによる力発生に深く関与すると考えられる。これまでの研究により、ダイニン重鎖における構造変化部位周辺の一次構造を決定した。本年度はこの領域を特異的に認識する抗体を作製し、微小管滑り運動に伴うダイニンの動的構造変化を明らかにすることを目的として研究を進めた。まず、抗体の低分子化と遺伝子組み換えによるエピトープ改変が容易に行える組み換え抗体の作製を試みた。その結果、ダイニンを認識する抗血清およびScFvライブラリーまでは作製することができたが、ファージ粒子上に発現した分子とダイニンとの間の結合が強くなく、ダイニンの研究に有用な抗体は得られなかった。一方、構造変化部位を含む20アミノ酸からなる3種類のペプチドに対するウサギポリクローナル抗体を作製した結果、かなり高い力価の抗体を得ることができた。一つは主要なATP加水分解部位に比較的近いTAV1部位を認識する抗体、及びダイニン重鎖の中央部のTAV4部位に対する抗体、さらに加水分解部位から離れてC末端側に存在するT2部位に対する抗体である。すべての抗体がムラサキウニ精子の外腕ダイニンを特異的に認識し、内腕ダイニンに対する交叉は見られなかった。また、TAV1抗体、TAV4抗体についてはアミノ酸配列から予想されるように、サケやホヤ等、他の動物精子の外腕ダイニンとの交叉性が認められたのに対し、T2抗体はウニ精子ダイニンとのみ反応を示した。ただし、未変性状態のダイニンとはいずれも反応せず、ATPase活性も阻害しなかった。従って、今後はFabフラグメント等の低分子化を検討し、微小管滑り運動の阻害や、構造変化の状態に応じたダイニンのラベリングへの応用の可能性を調べる必要がある。

The quality of the large and small pipe system is very high. When ATP is hydrolyzed, the structural transformation starts and the structural transformation starts. During this research, the primary structure around the structural transformation site that is lost during re-locking was determined. This year's domain-specific antibody control, micro-tube slide movement, and structural change The low molecular weight of the antibody and the low molecular weight of the antibody are easy to change. The results of the study show that the antiserum and ScFv are very useful in the study of antiserum and ScFv. A side, structural transformation site contains 20 kinds of acid, three kinds of antibody, two kinds of high strength antibody, three kinds of high strength antibody. One is to recognize the antibody at the TAV1 site near the main ATP hydrolysis site, the other is to recognize the antibody at the TAV4 site near the central part of the ATP hydrolysis site, and the other is to recognize the antibody at the T2 site near the C-terminal side of the ATP hydrolysis site. The antibody is used to identify the sperm in the outer arm and to identify the sperm in the inner arm. TAV1 antibody, TAV4 antibody, etc., other animal sperm, etc. The enzyme activity is inhibited by the enzyme activity. In the future, it is necessary to adjust the possibility of low molecular weight, resistance to micro-tube sliding motion, and structural transformation.