神経細胞死とアポリポ蛋白受容体について

关于神经元细胞死亡和载脂蛋白受体

• 批准号: 09280102
• 负责人: 大内 尉義
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280102/
• 关键词: ApolipoproteinE; ApolipoproteinEイソ蛋白; ApolipoproteinE受容体; 神経細胞死

アポリポ蛋白E(ε4)がアルツハイマー病発症の危険因子とされている。しかし、その遺伝子産物であるApoE4が、アルツハイマー病の病態機序にどのように係わっているかは不明である。そこで、ApoEのイソ蛋白の違いが神経細胞死に関連する可能性を想定し、実験を行った。ApoEは細胞膜に存在するApoE受容体を介して取り込まれることが知られている。そこで神経細胞に発現しているApoE受容体(LDL受容体、VLDL受容体、apoE2受容体等)の受容体を強制発現するCHO細胞を作製し、この培養細胞系を用いてApoEイソ蛋白の細胞毒性をMIT法あるいはWST法により検討した。3種のヒトApoE受容体cDNAを発現するネオマイシン耐性のCHO細胞を得た(CHO/LDLR、CHO/VLDLR、CHO/apoER2)。これらの細胞の培養系にリコンビナントApoE2,3,4(150mM)を添加し、継時的に抗ApoE抗体による蛍光抗体法で細胞内のApoE動態を検索した。いずれの細胞においてもApoE3,4では添加後30分頃より細胞質内に特異蛍光を認め、その強度は3時間後まで増強していった。それ以降、特異蛍光は細胞の辺縁に局在するようになり、やがて消退していった。ApoE3,4を取り込んだ細胞は核が肥大し、かつプラスチック皿より剥離する傾向を示した。ApoE2を添加した場合は、どの細胞も微弱な蛍光しか発さず、また形態変化も認めなかった。ApoEを添加後3時間の時点でMIT法により細胞毒性を調べると、どの細胞においてもApoE4>3>2の順に細胞毒性効果を認めた。次にH_2O_2の毒性とApoEの効果との相関を調べるために、これらの細胞でまずH_2O_2の細胞毒性を調べた。0mM〜0.5mMまでの濃度では、用量依存的な細胞毒性が認められた。そこで、0.25mM濃度のH_2O_2の細胞毒性状態において、ApoEイソ蛋白の効果を調べたところ、ApoE4>3>2の順にH_2O_2毒性を助長する傾向が認められた。ApoE2については、その取り込み効率が低いので評価はできないが、ApoE3とApoE4を比較した場合、ApoE4の方が細胞内からの細胞毒性効果が強いことが明らかとなった。

The protein E(ε4) is a risk factor for disease development. ApoE4 The possibility of the association of ApoE protein with neuronal cell death is considered and implemented. ApoE is a receptor that exists in cell membranes. The expression of ApoE receptors (LDL receptors, VLDL receptors, apoE2 receptors, etc.) in CHO cells and the cytotoxicity of ApoE proteins in cultured cell lines were investigated by MIT and WST methods. Three kinds of ApoE receptor cDNA were expressed in CHO cells (CHO/LDLR, CHO/VLDLR, CHO/apoER2). The cellular dynamics of ApoE2,3, and 4(150mM) were detected by light antibody assay when anti-ApoE antibodies were added to the culture system. In the cytoplasm, the specific light intensity increased after 30 minutes of ApoE addition. The light of the sky is falling, and the light of the sky is falling. ApoE3,4 shows the tendency of cell nucleus hypertrophy and separation. ApoE2 is added to the cell, and the cell is weakly illuminated and morphologically recognized. 3 hours after ApoE was added, MIT method was used to determine the cytotoxicity effect. In addition, H_2O_2 toxicity and ApoE effect are related to the regulation of H_2O_2 cytotoxicity. 0mM ~ 0.5 mM concentration and dose-dependent cytotoxicity. It is believed that the cytotoxicity of H_2O_2 at 0.25 mM concentration is regulated by ApoE 4> 3>2 and H_2O_2 toxicity is promoted by ApoE4>3>2. ApoE2, ApoE 3, ApoE4, ApoE3, ApoE4, ApoE4, ApoE

项目成果

Kozaki K,Ouchi Y, et al.: "Role of activin-A and follistain in foam cell formation of THP-1 macrophages." Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17. 2389-2394 (1997)

Kozaki K、Ouchi Y 等人：“激活素 A 和卵泡素在 THP-1 巨噬细胞泡沫细胞形成中的作用。”

江頭正人、大内尉義: "老年医学テキスト(老年者に特有な症候 褥瘡)" (社)日本老年医学会編,メジカルビュー社(東京), 389 (1997)

Masato Egashira、Takayoshi Ouchi：“老年医学文本（老年人特有的症状：褥疮）”，日本老年医学会编辑，Medical View Publishing（东京），389（1997）

Nagano K,Ouchi Y, et al.: "Identification of arginine vasopressin mRNA in rat aortic smooth muscle cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.231. 831-834 (1997)

Nagano K、Ouchi Y 等人：“大鼠主动脉平滑肌细胞中精氨酸加压素 mRNA 的鉴定”。

Jiang L,Ouchi Y, et al.: "Central vasopressin is required for the complete development of deoxycorticosterone-salt hypertension in rats with hereditary diabetes insipidus." J.Auton.Nerv.Syst.62. 33-39 (1997)

Jiang L、Ouchi Y 等人：“遗传性尿崩症大鼠脱氧皮质酮盐高血压的完全发展需要中央加压素。”

Teramoto S,Ouchi Y, et al.: "Assessment of autonomic nervous function in elderly subjects with orwithout postprandial hypotension." Hypertens.Res.20. 257-261 (1997)

Teramoto S、Ouchi Y 等人：“患有或不患有餐后低血压的老年受试者的自主神经功能评估。”