Entwicklung einer online-Messtechnik in Mikrotiterplatten für rekombinante Proteine mit kurzen Tags

分子生物技术研究进展与进展hochdurchsatzfähigen筛选研究进展与进展[j]。In diesem zusamenhang stellmicrotiterplatten (mtp), eenenenhervorrgenen microbioreakarray zur Kultivierung von microorganiserallardar。mitlerweer sind durch die verfahrenstechnische Charakterisierung vieler microreaktorsysteme die Grundlagen fgr das scalup in den herkömmlichen Labormaßstab gelegt。Um die Möglichkeiten des microkroma ßstabs efficient einzusetzen and rationale Entscheidungen aus den vielen parallelen Experimenten abzuleiten, ist es unumgänglich kinetische Daten wie Biomassen- and wertproducktkonzentration aus den microkulturen zu erlangen。【参考译文】生物科学技术与光学技术与光学技术的结合与应用：1 .生物科学技术与光学技术的结合。Diese technology ermöglicht neben der Messung der Biomasse die Konzentrationsmessung des wertproducktes （im Folgenden：“Zielproteins”），welches mit GFP （gricn Fluoreszierendes Protein）融合。在大肠杆菌中融合ziel蛋白与GFP的致敏性分析Fällen night möglich。麻省理工大学光学工程项目（Mit diem project）在全球范围内的应用。研究对象：蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质、蛋白质和蛋白质。Zum einen werden zur Zielprotein-Erfassung optisch活性标签verwendet， welche荧光蛋白Aminosäuren，以及色氨酸和酪氨酸醛（im Folgenden " PolyTrp-Tag"）。大北solsolerstals untersucht werden， wie selektiv die荧光标记（in Abhängigkeit von seiner Zusammensetzung） gegen<s:1> berdem flsigkeitshintergrundetektiert werden kann。Zum anderen werden die Tags verwendet, zelelprotein， MTP-Boden选择性，zelelprotein, Optik zuerfassen。Verschiedene Anreicherungsprinzipien, wie Affinität zu Nickel-Ionen sowie Volllängenantikörpern （，AK“） oder rekombinanten einzelsträngigen Antikörperfragmenten （” scFv"） werden eingesetzt and hinsichtlich ihrer Selektivität and Praktikabilität verglichen。麻省理工学院（Mit）的生物技术与生物技术（Mit）和生物技术（Mit）的蛋白质浓度与生物技术（Mit）、生物技术（Mit）、生物技术（Mit）、生物技术（Mit）、生物技术（Mit）和生物技术（Mit）。[3] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [4]新地质信息处理技术与新地质信息处理技术<e:1> [j] . Produktionsstämme bzw。Medien schaffen。模型系统（微生物和Zielprotein）在大肠杆菌中表达von Pankreaskarzinom- spezifischen einzelsträngigen rekombinanten Antikörperfragmenten (scFv) gewählt。大肠杆菌中蛋白质的表达与表达-文化自由主义者在巴氏菌群中的研究。Damit lässt siich der Aufwand bei der Expression des Zielproteins mit terschiedlichen Tags, aber ach ensprechender Tagspezifischer scFv, welche auf dem MTP-Boden immobilisiert werden, bewältigen。

Die Generierung neuer Zielproteine durch die molekulare Biotechnologie hat zu einem riesigen Bedarf an effizienten und hochdurchsatzfähigen Screening-Verfahren geführt. In diesem Zusammenhang stellen Mikrotiterplatten (MTPs) einen hervorragenden Mikrobioreaktorarray zur Kultivierung von Mikroorganismen aller Art dar. Mittlerweile sind durch die verfahrenstechnische Charakterisierung vieler Mikroreaktorsysteme die Grundlagen für das Scale-Up in den herkömmlichen Labormaßstab gelegt. Um die Möglichkeiten des Mikromaßstabs effizient einzusetzen und rationale Entscheidungen aus den vielen parallelen Experimenten abzuleiten, ist es unumgänglich kinetische Daten wie Biomassen- und Wertproduktkonzentration aus den Mikrokulturen zu erlangen. Als Ausgangspunkt für das Forschungsvorhaben dient die am Lehrstuhl für Bioverfahrenstechnik entwickelte Technologie zur optischen, nicht invasiven online-Verfolgung von geschüttelten mikrobiellen Kulturen. Diese Technologie ermöglicht neben der Messung der Biomasse die Konzentrationsmessung des Wertproduktes (im Folgenden: „Zielproteins"), welches mit GFP (Grün Fluoreszierendes Protein) fusioniert wird. Allerdings ist die Fusion eines Zielproteins mit GFP in sehr vielen Fällen nicht möglich.Mit diesem Projekt soll ein universeller optischer online Nachweis von Zielproteinen ohne Fusion mit GFP ermöglicht werden. Zu diesem Zweck sollen sezernierte Proteine mit Hilfe kurzer Tags (in der Größenordnung eines His-Tag) an den Mikroreaktorboden gebunden und dort delektiert werden. Zum einen werden zur Zielprotein-Erfassung optisch aktive Tags verwendet, welche fluoreszierende Aminosäuren, wie Tryptophan und Tyrosin enthalten (im Folgenden „PolyTrp-Tag"). Dabei soll erstmals untersucht werden, wie selektiv die Fluoreszenz eines solchen Tags (in Abhängigkeit von seiner Zusammensetzung) gegenüber dem Flüssigkeitshintergrund detektiert werden kann. Zum anderen werden die Tags verwendet, um das Zielprotein am MTP-Boden selektiv anzureichern und dort mit fokussierender Optik zu erfassen. Verschiedene Anreicherungsprinzipien, wie Affinität zu Nickel-Ionen sowie Volllängenantikörpern (,AK") oder rekombinanten einzelsträngigen Antikörperfragmenten („scFv") werden eingesetzt und hinsichtlich ihrer Selektivität und Praktikabilität verglichen. Mit einer direkten und universellen online- Erfassung von Biomasse- und Zielproteinkonzentration besitzt die zu entwickelnde Technologie das Potential erstmals wichtige Informationen über das Wachstum sowie Proteinexpression mikrobieller Kulturen im ^-Maßstab zu liefern. Zukünftig soll die Proteinexpression in unterschiedlichen Stämmen auf verschiedenen Medien hochparallel untersucht werden. Die neu gewonnenen Informationen sollen eine Grundlage für eine rationale und effiziente Auswahl geeigneter Produktionsstämme bzw. Medien schaffen.Als biologisches Modellsystem (Mikroorganismus & Zielprotein) wird die Expression von Pankreaskarzinom- spezifischen einzelsträngigen rekombinanten Antikörperfragmenten (scFv) in E. coli gewählt. Die Expression und Sezernierung von kleinen Proteinen wie scFv in den E. coli- Kulturiiberstand ist in der Gruppe Barth bereits etabliert. Damit lässt sich der Aufwand bei der Expression des Zielproteins mit unterschiedlichen Tags, aber auch entsprechender Tagspezifischer scFv, welche auf dem MTP-Boden immobilisiert werden, bewältigen.