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光受容関連分子の遺伝子操作による研究

利用光感受相关分子的基因操作进行研究

基本信息

批准号：
01621001
负责人：
徳永史生
金额：
$ 20.8万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本計画研究では遺伝子操作技術を用いて、光受容関連蛋白質の微細構造と機能、光受容関連蛋白質遺伝子の構造と発現、細胞内で起こるそれら遺伝子発現の光調節機構を解析することを目的とした。光受容蛋白質の構造決定と機能部位の探索、網膜で特異的に発現している蛋白質であるMEKA蛋白とビジニンの一次構造を、それらのcDNAの塩基配列から決定した。MEKA蛋白はトランスデューシンのサブユニットと結合することが明らかとなった。またビジニンはカルシウムを結合する蛋白で、順応に働いている可能性が示された。ニワトリの色覚色素の遺伝子をクローン化し、塩基配列からアミノ酸配列を推定した。またヤツメウナギのロドプシのcDNAを単離し、その塩基配列を決定し、これまで塩基配列が決定されている脊椎動物の視物質と比較し、機能的に重要な部位を推定した。視物質の再生に重要な働きをするレチナール結合蛋白質のcDNAを用いて、in vitro発現系で発現させレチナール結合活性を調べた。光化学反応中心の蛋白質、特に酸素発生に関与するマンガン結合蛋白質を、大腸菌の全蛋白質の15%を占める量で発現させた。フィトクロムの発現を制御するプロモータ領域にイネ、オートムギやエンドウで相同性の高い塩基配列が見つかった。また、そこに結合すると思われる蛋白質の存在が示唆された。酵母、大腸菌の光回復酵素のキメラ蛋白質を作り、活性部位を推定した。また、大腸菌の光回復酵素について、アミノ酸残基の欠失した、または、余分に挿入された酵素を作り、光回復活性を測ることによって、活性部位を推定した。大腸菌に光で抑制されるプロモータのあることが明らかとなり、そのアクションスペクトルの極大は480nm付近であることが分かった。

The aim of this project is to investigate the application of gene manipulation techniques, the microstructure and function of photoreception-related proteins, the structure and expression of photoreception-related proteins, and the analysis of photoregulatory mechanisms for their expression in cells. The structure determination of photoreceptors, the exploration of functional sites, the discovery of specific proteins in the retina, the determination of the primary structure of MEKA proteins, and the alignment of cDNA MEKA is a white paper with a white paper. The possibility of binding to a protein in a protein sequence is shown. The color of the pigment is determined by the molecular weight of the pigment. To determine the sequence of the cDNA sequences of the vertebrate species, to determine the sequence of the cDNA sequences of the vertebrate species and to estimate the important parts of the vertebrate species. It is important for the regeneration of visual substances to modulate the binding activity of the protein cDNA in vitro. Photochemical reaction center protein, specific acid production and protein binding, Escherichia coli total protein content of less than 15%. The occurrence of a virus is controlled by the presence of a virus in the field, and the identity of the virus is determined by the presence of a virus. The presence of protein is an indication of protein binding. Yeast, Escherichia coli photo-reversion enzyme protein function, active site estimation In addition, the photo-reversion enzyme of Escherichia coli was detected, and the active site was estimated. Coliform bacteria are inhibited by light. The maximum wavelength is 480nm.