新規遺伝子操作系による組換えHBVを用いたHBV polymerase動態解析

使用新型基因工程系统使用重组 HBV 进行 HBV 聚合酶动力学分析

• 批准号: 22K07087
• 负责人: 和田 真実
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07087/
• 关键词: HBV; リバースジェネティクス; 転写産物; pgRNA; 粒子産生; HBV転写産物; HBV reverse genetics; HBVポリメレース; 遺伝子導入

現在B型肝炎ウイルス(HBV)研究で用いられているウイルスは、主にHBVゲノムDNAをコードしたプラスミドを肝細胞株に導入することで作製されている。しかしながら、それぞれのウイルス遺伝子が異なるフレームで重なってコードされているため、ウイルスの遺伝子操作が制限され、組換えウイルスの作製は大変困難である。ゆえに、汎用的な新規HBV遺伝子操作系の確立は、HBV研究を大きく進展させる可能性が高い。本研究において、in vitro transcriptionによって作製されたpgRNAを細胞導入した結果、HBV逆転写酵素は機能するものの、主に、ゲノム複製の中間体であるsingle stranded DNAがカプシドに内包されることが分かった。また、計画にあったＴ7ポリメレースを用いたシステムでは、直接pgRNAを細胞内に導入する方法と同様、非常に細胞上清中への粒子産生の効率が悪いことが分かった。今後は、細胞内への効率的なpgRNA導入方法を検討していくことに着目し、アデノウイルスベクターを用いたpgRNA発現を試みる。

Now in the study of hepatitis B virus infection (HBV), HBV virus was used to treat hepatitis B virus infection (HBV). In the study of hepatitis B virus infection, hepatitis B virus infection (HBV) was used in the study of hepatitis B virus infection (HBV). Please do not know what to do. Please do not know what to do. Please do not know what to do. The new HBV sub-operation system that is used and confirmed, and the development of HBV research, the possibility is very high. In this study, the results of pgRNA cell entry test and HBV reverse transcription enzyme sequencing were used in this study. in this study, we analyzed the results of pgRNA cell entry, HBV reverse transcription, enzyme reverse transcription, and replication in this study. in this study, in this study, we analyzed the results of this study. The method is the same as that of direct pgRNA. The method is the same as that of the supernatant. The rate of particle production is different. In the future, the pgRNA entry method of the intracellular concentration rate will be used to determine the accuracy of the target, and the pgRNA will be used to detect the error.