新規遺伝子操作系による組換えHBVを用いたHBV polymerase動態解析

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現在B型肝炎ウイルス(HBV)研究で用いられているウイルスは、主にHBVゲノムDNAをコードしたプラスミドを肝細胞株に導入することで作製されている。しかしながら、それぞれのウイルス遺伝子が異なるフレームで重なってコードされているため、ウイルスの遺伝子操作が制限され、組換えウイルスの作製は大変困難である。ゆえに、汎用的な新規HBV遺伝子操作系の確立は、HBV研究を大きく進展させる可能性が高い。本研究において、in vitro transcriptionによって作製されたpgRNAを細胞導入した結果、HBV逆転写酵素は機能するものの、主に、ゲノム複製の中間体であるsingle stranded DNAがカプシドに内包されることが分かった。また、計画にあったＴ7ポリメレースを用いたシステムでは、直接pgRNAを細胞内に導入する方法と同様、非常に細胞上清中への粒子産生の効率が悪いことが分かった。今後は、細胞内への効率的なpgRNA導入方法を検討していくことに着目し、アデノウイルスベクターを用いたpgRNA発現を試みる。