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骨芽細胞シクロオキシゲナ-ゼ動態のcAMPによる調節

cAMP 对成骨细胞环氧合酶动力学的调节

基本信息

批准号：
01641528
负责人：
山本尚三
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

骨芽細胞MC3T3-E1では、アラキドン酸から骨吸収作用のあるプロスタグランジンE_2(PGE_2)を生成する。種々のホルモンの効果を検討するうちに、エピネフリンを培地に添加するとPGE_2の放出が著明に亢進されることが見出された。このエピネフリンの刺激で生成したcAMPが、PGE_2合成促進に介在するものと考えられた。PGE_2合成の各段階を調べた結果、シクロオキシゲナ-ゼ活性が上昇していることが明らかになった。培地へ放出されるPGE_2を定量し、また、細胞から取出したシクロオキシゲナ-ゼの活性を測定する時に、転写および翻訳の阻害剤を加えるとそれぞれが抑制されることから、既存のシクロオキシゲナ-ゼの活性化ではなく、新規の合成が起こっているものと思われる。このことを確認するため、ウエスタ-ンブロット法を実施し、エピネフリン処理した細胞のシクロオキシゲナ-ゼを免疫染色すると、無処理の細胞に比べて、より濃厚な染色バンドがシクロオキシゲナ-ゼの位置に認められ、酵素量の増大を示した。さらに、ヒツジ精のう腺シクロオキシゲナ-ゼのcDNAを使ってノ-ザンブロット法で調べると、エピネフリン処理することによって、シクロオキシゲナ-ゼmRNAの増量していることが明らかになった。膜透過性のジブチリルcAMPによって亢進するPGE_2放出が転写・翻訳阻害剤で抑制され、また、ジブチリルcAMPがmRNAを増量することから、エピネフリンによるシクロオキシゲナ-ゼ誘導に、cAMPが介在するものと考えられた。

Bone bud cell MC3T3-E1 can produce E_2(PGE_2) during bone resorption. The results of the study showed that PGE_2 was released from the brain. The stimulation of PGE_2 synthesis and cAMP production is the key to the development of PGE_2 synthesis. PGE_2 synthesis of various stages of the results of the adjustment, the rise in activity, the rise in activity PGE_2 release from culture medium is quantified, extracted and activated, and the synthesis of new PGE_2 is initiated. This is confirmed by the fact that the cell culture method has been performed, that the cells treated with the enzyme culture method have been immunostained, that the cells without the enzyme culture method have been stained more heavily than the cells without the enzyme culture method, and that the enzyme content has increased. The expression of mRNA was detected by the cDNA processing method. PGE2 release is inhibited by membrane permeability and cAMP activation, and the expression of cAMP mRNA is inhibited by membrane permeability and cAMP activation.