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パッチクランプ法によるレセプタ-作働性カルシウム流入とその制御機構の解明

使用膜片钳法阐明受体激动的钙内流及其控制机制

基本信息

批准号：
01641537
负责人：
久野みゆき
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リガンドによる刺激-分泌連関の過程に重要な役割を果たすと考えられるレセプタ-作働性カルシウム(Ca)流入のメカニズムを解明する目的で、ラット腹腔内肥満細胞にパッチクランプ法を行ない、分泌刺激物質によって誘起される電流の性質を解析した。分泌刺激物質のcompound 48/80で刺激すると、細胞外Caに依存する内向き電流が生じ、その活性化が脱分極にはよらず、なんらかのセカンドメッセンジャ-によるものと推定された(Kuno et al.,1989)。肥満細胞浮遊液に蛍光性Ca指示色素fura-2を負荷し、刺激後の細胞内Ca濃度の変化を測定したところ、2峰性の上昇が観察され、第2峰は細胞外Caを低下させると消失したためCaの流入によるものと考えられた。外液の2価イオンをマンガン(Mn)に替えると、前記の第2峰とよく似た時間経過でMnの流入による蛍光の消退が観察され、Ca透過性チャネルはMnにも透過性があることが示された。百日咳毒素で前処理した標本では、Ca、Mnの流入とも抑えられた。cell attached patchでは、compound 48/80によってバリウム(Ba)電流が活性化されるが、百日咳毒素によって脱顆粒が抑えられた細胞では、著明なBa電流は誘起されず、チャネルの活性化にGTP結合蛋白が関与していると推定された。又わずかに誘起された例では、単一チャネルの振幅には変化がなく、開口確率が減少したものと推定された。これらの結果は、脱分極によって開口する膜電位依存性Caチャネルとは、異なるタイプの2価イオン透過性チャネルが肥満細胞の活性化過程に寄与することを示唆するが、抗原など生理的刺激下での役割などは今後検討しなければならない課題である。結果は、生理学会(1989年4月)、NCPカンファレンス(1989年10月)等で報告している。

The process of stimulation-secretion linkage is important and the results of the test are examined.えられるレセプタ-作働性カルシウム(Ca) inflow into the のメカニズムAnalysis of the purpose of に明する, にパッチクランプ法を行ない of intra-abdominal fat cells, secretion of stimulating substances によって inducing current of されるcurrent. A compound that secretes stimulating substances 48/80 stimulates stimulation, extracellular Ca dependence, inward current flow, and activation detachment Kuno et al., 1989). Loading of fertilized cell suspension with photoactive Ca indicating pigment fura-2, measurement of changes in intracellular Ca concentration after stimulation, The 2nd peak is an increase in the amount of extracellular Ca, and the 2nd peak is a decrease in extracellular Ca. External fluid の2価イオンをマンガン(Mn)に为えると、previous note の二峰とよくsimilarたtime経passでMnの流Into the による蛍のfading Observation され, Ca permeability チャネルはMn にも permeability があることがshow された. The preparation of pertussis toxin is done in the specimen, and the inflow of Ca and Mn is done in a controlled manner. cell attached patchでは、compound 48/80 によってバリウム (Ba) current activation されるが, whooping cough toxin によって degranulation が suppress えられた fine Cytokinesis and light-emitting current are induced by GTP-binding protein activation and GTP-binding protein activation, and are presumed to be the same. It also induces the された examples of では, the amplitude of the 単一ャネルのchanges and the opening accuracy decreases and the したものと inference is made.これらの Resultsは、DepolarizationによってOpeningするMembrane potential dependence Caチャネルとは、different なるタイプの2価イオンtransparent チャネルが发満 fine The activation process of cells is related to the physiological stimulation of the antigen and the physiological stimulation of the antigen. The results were reported by the Physiological Society (April 1989), NCP Laboratory (October 1989), etc.