多重機能スクリーニングによるプロトンチャネルおよびプロトンシグナル関連分子の探索

通过多功能筛选寻找质子通道和质子信号相关分子

基本信息

批准号：
18659057
负责人：
久野みゆき
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の初めに国内外2つの研究室から相次いで電位依存性プロトンチャネル(H^+チャネル)の性質をもつ分子(VSOPおよびHv)が発見された。そこで、この分子を手がかりにプロトンシグナリングに関わる分子の機能スクリーニングを行った。私達がマイクログリアとRBLのサブトラクションによって作成したデータベースを検索したが、これらの遺伝子に相同性の高いものは含まれていなかった。マウスマイクログリアにVSOPのsiRNAを導入するとnativeH^+電流密度が約1/2に減少した。VSOP遺伝子を過剰発現させた細胞で記録されるH^+チャネルの活1生化閾値はnativeH^+チャネルよりも有意に低く、同一電位でのゲーティングが速い傾向があった。このようにVSOP過剰発現によるH^+チャネルとnativeH^+チャネルは機能的に良く類似しているものの相違点があり、チャネル密度や分子会合の影響に加え、チャネル活性を直接間接に調節する因子が存在する可能性が示唆された。そこで、私達のデータベースより抽出した5個の遺伝子(MG20、23、43、153、161)をVSOP遺伝子と共発現させた。MG20ではH^+チャネル活性化速度が増加する傾向が見られたが、他4種では特に大きな変化が見られなかった。ここまでの実験は全て室温で行ったが、H^+チャネル活性は温度の影響を受けることが知られているので、より生理的な温度で再検討する必要がある。本研究で蓄積したデータベース、アイデアは今後プロトンシグナリングに関わる分子の探索を続けていく上で大いに役に立つと考えている。

在今年年初，在日本和国外的两个实验室中，发现了具有电压依赖性质子通道（H^+通道）特性的分子（VSOP和HV）。因此，我们将此分子用作筛选质子信号传导分子的功能性筛选。我们搜索了通过减去小胶质细胞和RBL创建的数据库，但不包含这些基因的任何高度同源物质。将VSOP siRNA引入小鼠小胶质细胞中，将本机^+电流密度降低了约1/2。在过表达VSOP基因的细胞中记录的H^+通道的活性1生物元化阈值明显低于AnitialH^+通道的活性阈值，并且在相同电位上具有更快的门控的趋势。因此，尽管由于VSOP过表达而引起的H^+和本地H^+通道在功能上相似，但存在差异，这表明除了通道密度和分子关联的影响外，直接和间接调节通道活性的因素也可能存在。因此，从我们的数据库中提取的五个基因（MG20、23、43、153、161）与VSOP基因共表达。 MG20显示出增加H^+通道激活速率的趋势，但在其他四个物种中未观察到显着变化。到目前为止，所有实验均在室温下进行，但是由于已知H^+通道活性受温度影响，因此有必要在更生理的温度下重新检查它。我们认为，这项研究中积累的数据库和思想将在未来继续寻找参与质子信号传导的分子方面有很大帮助。