チトクロームP-450sccとその還元酵素系との反応メカニズムと結合部位の研究

细胞色素P-450scc与其还原酶系统反应机制及结合位点研究

• 批准号: 63635508
• 负责人: 原 孝之
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nakamura Gakuen College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63635508/
• 关键词: アドレノドキシン還元酵素; アドレノドキシン; チトクロームP-450scc; コレステロール側鎖切断反応; 酵素反応機構; 架橋反応; 結合部位; タンパク質複合体

副腎皮室ミトコンドリアのステロイド水酸化酵素系を構成するアドレノドキシン還元酵素(AR)、アドレノドキシン(AD)及びチトクロームP-450scc(P-450scc)の反応メカニズムと構造との相関を研究するために、63年度には、ADとP-450sccのcross-Linked complexを水溶性カルボジイミドを用いて調整し、精製を試みた。P-450scc(140nmoL)とAD(430nmoL)とを8mMI-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドで、0℃、9時間反応させ、complexを調整した、セファデックスG-25でカルボジイミドを除去して濃縮し、セファデックスG-100カラムクロマトグラフィーを行い、未反応のADを除いた。さらに、CM-セファデックスC-50,DEAE-Bio-GeLAカラムクロマトグラフィーによりcross-linked complexを精製した。本complexの精製はAR-ADのcross-linked complexに比べて精製が困難であり、現在70%程度純粋な標品を得ている。今後、HPLCなどを併用して、純粋な標品を調整し、cross-linkした位置を決定することにより、P-450sccのAD binding sifeを決定したいと考えている。今回調整した部分精製標品のcross-linked complexをARによって還元させると、全P-450の15%程度を還元し、ADを1個添加すると活性の増加がみられた。次に、AR-ADのcross-linked complexによっても、AD-P-450sccのcross-linked complexを還元できることがわかった。これらの結果は、本反応メカニズムが、complexメカニズムによっても説明できることを示しており、従来考えられてきたシャトルメカニズムだけでは本反応を説明できなくなってきた。今後、純粋なAD-P-450sccのcross-linked complexでこのことを追求していきたいと考えている。

Adrenal skin chamber ミ ト コ ン ド リ ア の ス テ ロ イ ド more acidic enzyme system を constitute す る ア ド レ ノ ド キ シ ン yuan enzyme (AR), ア ド レ ノ ド キ シ ン (AD) and び チ ト ク ロ ー ム P - 450 SCC の (P - 450 (SCC), anti 応 メ カ ニ ズ ム と tectonic と の phase masato を research す る た め に, 63 annual に は, AD と P - 4 50 SCC の cross - Linked complex を water-soluble カ ル ボ ジ イ ミ ド を with い て try adjusting し, refined を み た. P - 450 SCC (140 nmol) と AD (430 nmol) と を 8 mmi - エ チ ル - 3 - (3 - ジ メ チ ル ア ミ ノ プ ロ ピ ル) カ ル ボ ジ イ ミ ド で, 0 ℃ and 9 time against 応 さ せ, complex を adjustment し た, セ フ ァ デ ッ ク ス G - 25 で カ ル ボ ジ イ ミ ド を remove し て concentration し, セ フ ァ デ ッ ク ス G - 100 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を い, not reverse 応 の AD を except い た. さ ら に, CM - セ フ ァ デ ッ ク ス C - 50, DEAE - Bio - GeLA カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り cross - linked complex を refined し た. The refining of this complexに AR-AD <s:1> cross-linked complexに is more difficult than the べて refining が であ, and the current 70% pure 粋な standard product を て て る る. In the future, HPLC な ど を and し て, pure 粋 な standard product を adjust し, cross - link し た position を decided す る こ と に よ り, P - 450 SCC の AD binding sife を decided し た い と exam え て い る. Today back to adjust し た part refined standard product の cross - linked complex を AR に よ っ て also yuan さ せ る と, degree of P - 450 の 15% を yuan し, AD を 1 added す る と active の raised plus が み ら れ た. The に, AR-AD <s:1> cross-linked complexによって った, AD-P-450scc <s:1> cross-linked complexを reducers で る る とがわ とがわ った った. こ れ ら の results は, the anti 応 メ カ ニ ズ ム が, complex メ カ ニ ズ ム に よ っ て も illustrate で き る こ と を shown し て お り, examine え 従 ら れ て き た シ ャ ト ル メ カ ニ ズ ム だ け で は this anti 応 を illustrate で き な く な っ て き た. In the future, pure 粋 な AD - P - 450 SCC の cross - linked complex で こ の こ と を pursuit し て い き た い と exam え て い る.

项目成果

Takayuki,Hara;Tokuji,Kimura: J.Biochem.105. 594-600 (1989)

Takayuki，Hara；Tokuji，Kimura：J.Biochem.105。

Takayuki,Hara;Tokuji,Kimura: J.Biochem.105. 601-605 (1989)

Takayuki，Hara；Tokuji，Kimura：J.Biochem.105。