3ーイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素の基質認識及び反応機構の動的解析

3-异丙基苹果酸脱氢酶底物识别及反应机制的动态分析

• 批准号: 02250215
• 负责人: 柿沼 勝己
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02250215/
• 关键词: 高度好熱菌; 3ーイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素; 3ーイソブチルリンゴ酸; 2ー0ーメチルー3ーイソプロピルリンゴ酸; 3ー(1ーフルオロイソプロピル)リンゴ酸; [2,3]Wittig転位; 不競争的阻害; イソクエン酸脱水素酵素

高度好熱菌<Thermus>___ー <thermophilus>___ー HBー8由来の3ーイソプロピルリンゴ酸脱水素酵素(IPMDH)の反応機構及び基質特異性を明らかにする目的で,ジアセトングルコ-スの分子全体の不斉構造を鋳型とし,鍵反応として[2,3]Wittig転位を用いる方法で,3ーイソブチルリンゴ酸及び2ー0ーメチルー3ーイソプロピルリンゴ酸を不斉合成した。前者はIPMDHに対するKm値はほゞ1/4であり、一方Vmaxは本来の基質である3ーイソプロピルリンゴ酸(IPM)のほゞ2倍であった。これはIPMがIPMDHの最も適した基質であると必ずしも言えないこと,すなわち,基質疎水性基に対する酵素の認識部位がIPMに対し完全に適合している訳ではないことを示唆している。後者の2ー0ーメチル体は全く基質とはなり得ず,IPMDHに対し阻害作用を示した。濃度変化によりLBプロットを取った結果、この阻害は不競争的であることが分った。二量体構造のため酵素に存在する二個所の活性部位のうち,実際には反応に関与しない側の基質認識部位と結合しているものと思われる。近縁のイソクエン酸脱水素酸素に対する2ー0ーメチルイソクエン酸の効果はこれまで全く検討されておらず、新しい知見である。さらに,機構依存型で酸素と共有結合を形成しうる阻害剤として3ー(1ーフルオロイソプロピル)リンゴ酸を設計し,既に開発していラセミ体IPMの合成法に倣ってラセミ体として合成した。IPMDHによる反応で生成するフッ素化2ーオキソイソカプロン酸からの脱フッ化水素と引き続く1,4付加反応を期待したが,本物質はIPMDHを全く阻害せず,本来の基質IPMとほゞ同等の基質活性を示した。本基質からの反応生成物の詳細な構造解析や ^<19>FーNMPを活用した酵素との相互作用の検討が次の課題である。

Highly good bacteria & lt;Thermus>___ & lt;thermophilus&gt The origin of HB 8 is due to the presence of acid dehydrase (IPMDH), acid dehydrase, acid dehydrase, acid 3% acid and 2'0% acid and 3% acid are not synthetic. The former is IPMDH, Km, IPM, IPM, 4, 4, 4, 3, 3, 2, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 3, 3, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4 The most important part of the IPM IPMDH is that it is necessary to tell you that it is necessary to say that there is a problem in the recognition of the enzyme in the water-based group, that is, the part of the IPM that is completely closed. In the latter case, the whole body was completely successful, and the blocking effect of IPMDH was demonstrated. To improve the accuracy of the LB results, and to prevent the indisputable results of the test. There are two active parts of the enzyme in the production of two-dimensional enzyme, and the combination of the two active parts of the enzyme and the basic enzyme of the enzyme can be used to determine the activity of the enzyme. I'm sorry to hear about the acid dehydration, the acid dehydrin, the acid, the acid. In recent years, there has been a combination of organ-dependent acid compounds to form a system for the synthesis of IPM compounds in the system, which can be used to synthesize the system. The IPMDH product contains two components: the acid, the dehydrated, the water, the acid, the acid, the water, the water, the water In this paper, the production of anti-products is analyzed. ^ & lt;19>F NMP active use of enzymes to interact with each other.

项目成果

Katsumi Kakinuma: "Enantioselective Synthesis if(2R,3S)ー3ーIsopropylmalic Acid and (2R,3S)ー3ーlsopropylー2ー0ーmethylmalic Acid,The Substrate and an Inhibitor of BーIsopropylmalate Dehyolrogenase"

Katsumi Kakinuma：“对映选择性合成（2R，3S）－3－异丙基苹果酸和（2R，3S）－3－异丙基－2－0－甲基苹果酸，B－异丙基苹果酸脱氢酶的底物和抑制剂”

Tohru Yamada: "Purification,Catalytic Properties,and Thermal Stalrlity of <Threo>___ーーDsー3ーIsopropylmolate Dehydrogenase Coded by leu B Gene from an extreme Thermophicl,<Thermus>___ー <theunophilus>___ー HB8" J.Biochem.,. 108. 449-456 (1990)

Tohru Yamada：“来自极端嗜热菌 <Thermus>_____ <theunophilus>_____ HB8 的 leu B 基因编码的 <Threo>_____Dsー3ー异丙摩尔酸脱氢酶的纯化、催化特性和热稳定性” J .生物化学.，108。449-456（1990）