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微生物のカルボニルレダクタ-ゼ類の基質認識機構の解析と生物活性物質生産への応用

微生物羰基还原酶底物识别机制分析及其在生物活性物质生产中的应用

基本信息

批准号：
02250221
负责人：
山田秀明
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

酵素反応の在する高い立体選択性を利用して,Dーパントテン酸あるいはその合成中間原料であるDーパントイルラクトンなどの光学活性アルコ-ル類の新しい生産方式を確立するために,(1)化学的合成法で得られるケトパントテン酸,ケトパントイルラクトン類のDーパントテン酸またはDーパントイルラクトン類への不斉還元,(2)脱水素酵素または酸化酵素によるLー体基質の立体選択的酸化反応を含むラセミ型パントテン酸またはパントイルラクトン類のDーパントテン酸またはDーパントイルラクトン類への変換について検討した。(1)については,グルコ-スを還元のエネルギ-源として<candida>___ー属や<Sporobolomyces>___ー属酵母のあるものが,ケトパントイルラクトンあるいはケトパントテン酸エステル類を,<Agrobacterium>___ー属細菌がケトパント酸をそれぞれ特異的に対応するDー体アルコ-ルへと変換することを認め,培養条件および反応条件の検討を行った結果,光学的に純粋な生成物を80〜120g/lの収量(変換率90%以上)で得ることができた。また,これらの還元反応に関与する酵素の精製単離を行い,それぞれが基質特異性を異にするNADPH依存性のカルボニルレダクタ-ゼであることを明らかにした。(2)については,<Nocardia>___ーや<Rhodococcus>___ー属の細菌にLーパントイルラクトンの酸化活性が高いこと,またR.erythropolisではLーパントイルラクトンの酸化によって生成したケトパントイルラクトンがさらにDーパントイルラクトンにまで還元する能力を併せて有することを認めた。最適条件下では20g/lのラセミ体パントイルラクトンをほぼ定量的にDーパントイルラクトンへと変換できた。上記の酸化反応に関与する酵素を均一に精製し,FMN依存性の新規な脱水素酵素であることを明らかにした。

In order to utilize the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(1) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(2) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(3) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(4) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(5) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(6) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(7) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(8) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis of intermediate raw materials,(7) chemical synthesis method to obtain the high stereoselectivity of enzyme reaction in the synthesis method to obtain the high stereoselectivity of intermediate raw materials,(8) chemical (2) Dehydrin enzyme is a kind of enzyme that can be used to acidify L-body matrix. (1)In addition, the growth of yeast, yeast, bacteria, and bacteria was investigated under culture conditions and reaction conditions. As a result, the amount of optically pure yeast products (conversion rate of more than 90%) was 80~120 g/l.<candida><Sporobolomyces><Agrobacterium>In addition, the enzyme purification process is also known as NADPH-dependent enzyme purification. (2)The acid activity of L. erythropolis is high, and the acid activity of L. erythropolis is high. The acid activity of L. erythropolis is high.<Nocardia><Rhodococcus>Under the optimum conditions, the volume of the solution is 20 g/l. The enzyme involved in the acidification reaction was purified uniformly, and the FMN-dependent enzyme involved in the dehydration was purified.