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糖鎖を識別するレクチンおよびモノクロ-ン抗体の精密構造認識とその応用

凝集素和糖链单克隆抗体的精确结构识别及其应用

基本信息

批准号：
02250226
负责人：
山下克子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.キカラスウリ根茎由来のレクチンキカラスウリの根茎からα_1ーアンチトリプシンーSepharoseおよびブタムチンSepharoseカラムを利用して2種類のレクチン,TJAーIおよびIIを分離精製した。両者共異なる分子サイズのサブユニットの二量体でTJAーIおよびIIの分子量は7万と6.4万である。また当電点はTJAーIで5.45,5.55,TJAーIIで5.80,5.95,6.05であることが判明した。両レクチン共基本的にはβーガラクトシル残基を認識するものの、TJAーIはGalβ1→4GlcNAcグル-プのガラクト-ス残基のCーb位にシアル酸あるいは硫酸残基が結合した場合著しく結合能が増大した。一方、TJAーIIはType1および2鎖のβーガラクトシル残基のCー2位の水酸基が7コ-スおよびN___ーーアセチル基で置換された場合に強い親和性を示した。なお、βーガラクトシル残基の認識機構は ^1HーNMRを用いて解析中である。2.赤インゲン豆レクチンーL_4およびE_4の糖結合特異性L_4ーPHAカラムの精密な糖結合特異性はGalβ→4GlcNAcβ1→6{Galβ1→3(4)GlcNAcβ1→2}Manα1→6Manβ1→4GlcNAc pynanosideであることを明らかにした。また、E_4ーPHAカラムはカラム温度を2℃に下げるとGalβ1→4GlcNAcβ1→6Manβ1→4GlcNAcβ1→4GlcNAcotに弱い親和性を示すことから両レクチンカラムはAsn型糖鎖の部分構造を同定する為に有効に応用できる。この性質を利用して約100μgの糖脂質分解酵素活性化因子の全糖鎖構造を決定した。3.イシガニレクチンの精製および性質イシガニレクチン(CJAーB)をSephadexーGー200に吸着させて精製し、その性質を調べた。分子量は30万でサブユニット19KDaの16量体である。pIは5.0である。このレクチンはαーガラクトシルあるいはαーグリコシル残基に特異的に反応した。又、Galβ1→3GalβーOーSynsorb又はGalα1→3(Fucα1→2)GalβーOーSynsrbと強い親和性を示したことから血液型B抗原と結合するレクチンに分類される。

1. The root system of TJA is divided into two types: TJA I and TJA II. The root system of TJA is divided into two types: TJA I and TJA II. The molecular weight of TJA I and II is 70,000 and 64,000 respectively TJA I <$5.45,5.55,TJA II <$5.80,5.95,6.05 The binding energy of the basic β-residue to the sulfuric acid residue at the C-b position of the TJA I Galβ1→4GlcNAc residue increases. A strong affinity was demonstrated in the case of substitution of the 7-amino acid group at the C-2 position of the TJA-II Type1 and 2-amino acid residues. The recognition mechanism of β-and β-residues was analyzed by 1H NMR. 2. L_4-PHA is the precise carbohydrate binding specificity of Galβ→4GlcNAcβ1→6{Galβ1→3(4)GlcNAc β1→2}Manα1→6Manβ1→4GlcNAc pyranoside. E_4 PHA chain has a weak affinity with Galβ1→4GlcNAcβ1→6Manβ1→ 4GlcNAcβ1→4GlcNAcot. This property was determined by using approximately 100μg of glycolipase activating factor and the total sugar lock structure. 3. Sephadex G-200 is used to refine and adjust the properties of the resin. Molecular weight: 300,000 pIは5.0である。A special reaction to a residue in a protein Galβ1→ 3 Gal β-0-Synsorb and Galα1→3(Fucα1→2)Galβ-0-Synsorb are classified as having strong affinity for B antigen.