副腎皮質特異的発現を示すPー450(11β)遺伝子のIn Vitroでの転写調節

P-450(11β) 基因的体外转录调控显示肾上腺皮质特异性表达

• 批准号: 02258216
• 负责人: 諸橋 憲一郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02258216/
• 关键词: Pー450(11β); 副腎皮質; in vitro転写; 組織特異性; cAMP

組織特異的転写および、cAMPによる転写調節機構を明らかにするために、副腎皮質特異的に発現するPー450(11β)遺伝子上流に位置するエレメントとそれに結合するタンパク質因子の解析を行なった。Pー450(11β)遺伝子上流をCATアッセイおよびin vitro転写系を用いて解析した結果、転写開始点より上流400bp以内に、4箇所のシスエレメント(Ad1,Ad2,Ad3,Ad4)を確認した。このうちAd1,Ad2は上流ー60/ー67,ー76/ー86bpに位置し、in vitro転写系でその活性が明らかになった。一方、マウス副腎皮質由来のYー1細胞を用いた実験においては、更に上流ー284/ー306,ー331/ー324に二つのエレメントAd3,Ad4の存在が確認された。Pー450(11β)遺伝子はcAMPによってその発現が調節されている。これらAd3,Ad4はcAMPに対して誘導的調節を行なうエレメントであるが、その配列はCREやAPー2とは異なるものであった。牛副腎皮質より調製した核抽出液を用いてフットプリントを行なったところ、これらのサイトに対する結合因子の存在が示唆された。これらのサイトをプロ-ブにゲルシフトアッセイを行なうと、それぞれに特異的なシグナルが確認される。副腎皮質以外の臓器、脳、肝臓、膵臓、より核抽出液を調節し、ゲルシフトアッセイを行なうとAd4サイトのみ副腎皮質特異的にシグナルを示すことがわかった。ゲルシフトの活性を指標に、Ad4結合タンパク質を牛副腎皮質の核抽出液より精製したところ、53Kdのタンパク質が得られた。このタンパク質が本遺伝子のcAMPによるや組織特異的発現に大きく寄与することが期待される。

Tissue specific planning write お よ び, cAMP に よ る planning write regulator を Ming ら か に す る た め に, adrenal cortex, specific に 発 now す る ー 450 P (11 beta) heritage 伝 upper-class に location す る エ レ メ ン ト と そ れ に combining す る タ ン パ ク qualitative factor analytical line を な の っ た. P ー 450 (beta) posthumous son 伝 upper を CAT ア ッ セ イ お よ び in vitro write planning department を in い て parsing し た results, planning to write the starting point よ り に within the upper 400 bp, four の シ ス エ レ メ ン ト (Ad1, Ad2, Ad3, Ad4) を confirm し た. こ の う ち Ad1, Ad2 は upper ー 60 / ー 67, 76 / ー ー 86 bp し に position, the in vitro planning write department で そ の active が Ming ら か に な っ た. Side, マ ウ ス adrenal cortex origin の ー 1 Y cells を using い た be 験 に お い て は, more に high-class ー / ー 306 284, 331 / ー ー 324 に つ の エ レ メ ン ト Ad3, Ad4 の exist が confirm さ れ た. P 伝 450(11β) has 伝 cAMPによってそ which is involved in が regulation されて る る る. こ れ ら Ad3, Ad4 は cAMP に し seaborne て line regulation of induced を な う エ レ メ ン ト で あ る が, そ の match column は CRE や AP ー 2 と は different な る も の で あ っ た. Bovine adrenal cortex よ り modulation し た nuclear extract を with い て フ ッ ト プ リ ン ト を line な っ た と こ ろ, こ れ ら の サ イ ト に す seaborne る combining factors の が in stopping さ れ た. こ れ ら の サ イ ト を プ ロ - ブ に ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を line な う と, そ れ ぞ れ に specific な シ グ ナ ル が confirm さ れ る. Adrenal cortex の viscera beyond routine, 脳, liver, Cui viscera, よ り nuclear extract を し adjustment and ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を line な う と Ad4 サ イ ト の み adrenal cortex specific に シ グ ナ ル を shown す こ と が わ か っ た. を ゲ ル シ フ ト の activity index に, Ad4 タ ン パ ク qualitative を bovine adrenal cortex の nuclear extract よ り refined し た と こ ろ, 53 kd の タ ン パ ク qualitative が must ら れ た. こ の タ ン パ ク qualitative が this heritage 伝 son の cAMP に よ る や tissue specific 発 に now big き く send す る こ と が expect さ れ る.

项目成果

本田 伸一郎: "Novel cAMP Regulatory Elements in Pー450(11β)Gene Promoter" J.Biochemistry. 108. 1042-1049 (1990)

Shinichiro Honda：“P-450(11β)基因启动子中的新型 cAMP 调节元件”J.Biochemistry 108. 1042-1049 (1990)

桐田 史朗: "Structural Analysis of Multiple Bovine Pー450(11β)Genes and Their Promoter Activities" J.Biochemistry. 108. 1030-1041 (1990)

Shiro Kirita：“多个牛 P-450(11β) 基因及其启动子活性的结构分析”J.Biochemistry 108. 1030-1041 (1990)

諸橋 憲一郎: "Tissue Specific Transcription of Pー450(11β)Gene in Vitro" J.Biochemistry. 108. 1050-1056 (1990)

Kenichiro Morohashi：“P-450(11β)基因的体外组织特异性转录”J.Biochemistry 108. 1050-1056 (1990)。