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核骨格と核骨格付着領域DNAの相互作用から見た染色体構造

从核骨架和核骨架附着区 DNA 相互作用看到的染色体结构

基本信息

批准号：
02260208
负责人：
筒井研
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260208/
关键词：
核骨格染色体 DNA結合タンパク質 DNAトポイソメラ-ゼII

项目摘要

核骨格付着領域DNA(SAR)と核骨格の結合にはSARを認識する核骨格蛋白質の関与が予測されるため、DNA結合活性を指標にこの蛋白質の同定を試みた。マウスIgκ遺伝子のSARをプロ-ブとしたサウスウェスタン法により、SARを特異的に結合する分子量120Kの核骨格蛋白質を見いだした。核骨格から可溶化した120K蛋白質とフィルタ-結合法を用いて、120K蛋白質が結合するDNA配列がIgκ遺伝子内のSARとして同定された365bpの領域内に存在することを証明した。さらに、この領域の一部をPCRで増幅して得たDNA断片(213bp)、およびfushi tarazu遺伝子のSAR(“upstream element"内の658bp)とも120K蛋白質は特異的に結合した。SARと120K蛋白質の結合に対してpoly(dG.dC)は全く影響を示さないがpoly(cA.dT)は強く競し、一般にSARがA/Tに富む領域であるという事実をよく反映していた。SARと120K蛋白質の相互作用をさらに詳細に解析するため、120K蛋白質のcDNAクロ-ニングを試みた。核マトリックスから精製した120K蛋白質をCNBrで限定的に断片化し、得られた8個のペプチドのN末端アミノ酸配列を決定した。これに基づき両方向に計10個の混合オリゴヌクレオチド・プライマ-を合成し、すべての可能なプライマ-対についてラット脳の全RNAを鋳型としたRTーPCRを行った。反応産物をクロ-ニングし、930bpのcDNA断片が挿入されたクロ-ンを得た。塩基配列を決定したところ、終止コ-ドを含まない310個のアミノ酸配列に翻訳され、内部には既知のペプチド配列が現れていることから真のクロ-ンであると断定した。得られた配列を入手可能なデ-タベ-スで検索した限りでは該当する蛋白質は存在しなかったが、一部の領域はpolynucleotide kinaseと弱いホモロジ-を示した。

DNA binding domain (SAR) and SAR binding domain (SAR) were used to identify the relationship between nuclear protein and prediction, DNA binding activity and protein identity. A 120K nuclear protein was identified by SAR-specific binding. The DNA sequence of Ig kappa gene was confirmed by using the 120K protein binding method. In addition, part of this domain was amplified by PCR, resulting in DNA fragment (213bp), Fushi tarazu gene SAR(658bp in "upstream element") and 120K protein specific binding. SAR 120K protein binding to poly(dG.dC) is a complete reflection of poly(cA.dT) and SAR 120K protein binding to A/T rich domains. Detailed analysis of interaction between SAR and 120K protein, cDNA analysis of SAR and 120K protein The 120K protein was purified by CNBr, and the N-terminal amino acid sequence was determined. The total RNA of the 10 genes in the base sequence was amplified by PCR. A 930bp cDNA fragment was obtained from the cDNA library. The base configuration is determined by the number of entries in the list, and the number of entries in the list is determined by the number of entries in the list. The protein in the protein domain was found to be present in a number of regions.