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核骨格と核骨格付着領域DNAの相互作用から見た染色体構造

从核骨架和核骨架附着区 DNA 相互作用看到的染色体结构

基本信息

批准号：
03256206
负责人：
筒井研
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物のDNAは核骨格付着領域(SAR、またMAR)と呼ばれる200ー300bpのDNA領域を介して核骨格に結合することにより、5ー100kbのトポロジカルに独立したル-プ状のドメインに分割されている。このような構成様式は細胞分裂中期染色体においても保在されており、SARを特異的に結合する核骨格タンパク質がこの構造の維持に関与しているものと推定される。我々はサウスウェスタン法を用いてSARと選択的に結合する分子量120kDaのタンパク質を核骨格に見いだした。核骨格におけるDNAータンパク質相互作用をより詳細に解析するため、このタンパク質の一次構造を調ベた。精製した120Kタンパク質をCNBrで断片化し、いくつかの断片のN末端アミノ酸配列を決定した。次に、この部分配列情報に基づいて対応するcDNAをクロ-ン化した。塩基配列の解析により現在までに推定長の約60%のアミノ酸配列が明らかになっている。配列ダ-タベ-スを検索すると、2つの領域に弱い相同性を示す数種のタンパク質が存在し、このことから120Kタンパク質には少なくとも2つの構造/機能ドメインのあることが推測された。このうちC末端に位置するドメインはグリシン(G)とアルギニン(R)に富み、XRGXを基本単位とした16回の繰り返しを含む特異な構造をもっている。この部分を大腸菌で発現して得たタンパク質は特定の条件下ではSARに対して特異的なDNA結合活性を示すことから、この領域がDNAとの結合に関与していると考えられる。これよりN末端側には、種々のATPaseやGタンパク質に認められるnucleoside triphosphate (NTP)の結合に必須な配列モチ-フ(GXXGXGKT)を含む領域が存在した。この部分が予測される活性をもつか否かについては現在不明である。

Eukaryotic DNA is a 200 - 300bp DNA domain that binds to a 100-kb DNA domain and is isolated from the 200 - 300bp DNA domain. The structure of the chromosome is related to the maintenance of the structure of the chromosome in metaphase and SAR-specific binding. The molecular weight of 120kDa and the molecular weight of 120kDa were determined by the SAR method. The nuclear structure of DNA is analyzed in detail, and the primary structure of DNA is adjusted. Refined to 120K, the quality of CNBr is determined by fragmentation, fragmentation and N-terminal acid alignment. The sequence information of these two genes is encoded in the cDNA library. About 60% of the estimated length of the amino acid sequence was determined by the analysis of the amino acid sequence. The similarity between the two domains shows that there are several kinds of structures and properties, and the structure and function of the structures and properties of the two domains are speculated. The position of the end of the line is different from that of the end of the line. The position of the end of the line is different from that of the end of the line. The position of the end of the line is different from that of the end of the line. Some of these E. coli species were found to have SAR-specific DNA binding activity under certain conditions. N-terminal ATPase, G-terminal ATPase, G-terminal ATPase, This part is expected to be active.