染色体の高次構造変化を伴う遺伝子発現調節機構の解明

阐明伴随染色体高阶结构变化的基因表达调控机制

• 批准号: 11239206
• 负责人: 筒井 研
• 金额: $ 31.68万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11239206/
• 关键词: トポイソメラーゼII; 神経細胞分化; 遺伝子発現; クロマチン構造; 核マトリックス; 初代培養; トピイソメアラーゼII

トポIIβに依存して転写誘導を受けるRad GTPase遺伝子(Class I)を含め7つの遺伝子がコードされるゲノム領域(約150kb)について,顆粒細胞分化における遺伝子の発現動態,転写誘導のトポIIβ依存性,およびMARの位置を解析した.その結果,さらに3つのClass I遺伝子,2つのClass III遺伝子,1つのClass IV遺伝子の存在が明らかになった.遺伝子領域と一部の遺伝子間領域には分化依存的,トポIIβ依存的に核マトリックスへの付着が著しく高まる部位とDNase Iに対する感受性が高まる部位があることが分かった.これらの部位の位置関係は,トポIIβの作用から転写誘導に至るまでの過程を明らかにする上で重要である.抗トポIIβ抗体で免疫沈降されるタンパク質をSDS-PAGEで分画しLC/MS/MSとIP/Western法で解析したところ,トポIIβと共沈するタンパク質のうち,SP120/SAF-A/hnRNP Uと同定されたタンパク質は主要なMAR結合タンパク質であり,トポIIβのMAR指向性を説明できる可能性が出てきた.核抽出液をショ糖密度勾配遠心にかけると,トポIIβは沈降速度が遅い二量体に相当する位置と大きな分子複合体が沈降する位置(約50S)に分かれて分画された.SP120の一部はこの複合体画分に一致した沈降パターンを示すことから,核内でもトポIIβとSP120がおそらく他のタンパク質と共に巨大な複合体として存在し,Class I遺伝子の転写誘導の過程に働く染色体機能装置を構成していることが示唆された.顆粒細胞の分化過程では,形態的にもクロマチン構造の脱凝縮が観察されているが,ヘテロクロマチン領域に局在することが知られるヒストンH3のトリメチル化されたLys9に対する抗体と抗トポIIβ抗体の二重染色を行うと,ヘテロクロマチンの周辺部でトポIIβが集積した部位が観察された.以上の結果は本研究の開始時に立てた作業仮説がほぼ正しかったことを示している.

Youdaoplaceholder0 IIβに dependent on <s:1> て転 writing-induced を by けるRad GTPase 伝 (Class I) contains を め 7 つ の posthumous son 伝 が コ ー ド さ れ る ゲ ノ ム field (150 KB) に つ い て, granular cell differentiation に お け る posthumous son 伝 の 発 dynamic now, planning to write induced の ト ポ II beta dependency, お よ び MAR の position を parsing し た. そ の results, さ ら に 3 つ の Class I have 伝 son, 2 つ の Class In Class III, there is a 伝 sub. In Class IV, there is a 伝 sub. There is a が Ming ら になった になった. Heritage 伝 sub-fields と a の heritage 伝 sub area between に は differentiation dependent, ト ポ II beta interdependent に nuclear マ ト リ ッ ク ス へ の pay the が the し く high ま る parts と DNase I に す seaborne high ま る feelings of sexual が る parts が あ る こ と が points か っ た. こ れ ら の parts の position masato は, ト ポ II beta の role か ら planning induced に to write る ま で の process を Ming ら か に す る で important で あ る. Anti ト ポ で II beta antibody immune sink さ れ る タ ン パ ク qualitative を sds-page で points draw し LC/MS/MS と IP/Western method で し た と こ ろ, ト ポ II beta と shen total す る タ ン パ ク qualitative の う ち, SP120 / SAF - A/hnRNP U と with fixed さ れ た タ ン パ ク main な MAR combining qualitative は タ ン パ ク qualitative で あ り, ト ポ II beta の MAR directivity を illustrate で き る possibility が out て き た. Nuclear extract を シ ョ sugar density hook with telecentric に か け る と, ト ポ II beta は sink rate が 遅 い 2 quantity body に quite す る position と big き な molecular complex が sink す る position (about 50 s) に points か れ て points draw さ れ た. SP120 の a は こ の complex drawing points に consistent し た sink パ タ ー ン を shown す こ と か ら, intranuclear で も ト ポ II beta と SP120 が お そ ら く he の タ ン パ ク qualitative と に huge total な complex と し し て, Class I chose 伝 son の induced の process planning write に 働 く chromosome function device を し て い る こ と が in stopping さ れ た. In the form of granular cell differentiation process で の は, に も ク ロ マ チ ン tectonic の condensation off が 観 examine さ れ て い る が, ヘ テ ロ ク ロ マ チ ン field に bureau in す る こ と が know ら れ る ヒ ス ト ン H3 の ト リ メ チ ル change さ れ た Lys9 に す seaborne る antibody と resistance ト ポ II beta antibody の line double staining を う と, ヘ テ ロ ク ロ マ チ ン の weeks 辺 department で ト ポ IIβが accumulates the た site が観 examines された. The above <s:1> results て at the beginning of this study <e:1>, に established the てた assignment 仮, which stated that がほぼ is positive, <s:1> った った とを とを and とを indicate, て and る る る る る.

项目成果

Tohge, H: "High incidence of antinuclear antibodies that recognize the matrix attachment region"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 285. 64-69 (2001)

Tohge, H：“识别基质附着区域的抗核抗体的发生率很高”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 285. 64-69 (2001)

Yabuki,M.: "Caspase activation and cytochrome c release during HL-60 cell apoptosis induced by a nitric oxide donor."Free Rad.Res.. 32. 507-514 (2000)

Yabuki,M.：“一氧化氮供体诱导的 HL-60 细胞凋亡过程中的半胱天冬酶激活和细胞色素 c 释放。”Free Rad.Res.. 32. 507-514 (2000)

Tsutsui, K.: "Immunohistochemical analyses of DNA topoisomerase II isoforms in developing rat cerebellum"J.Comp.Neurol.. 431. 228-239 (2001)

Tsutsui, K.：“发育中的大鼠小脑中 DNA 拓扑异构酶 II 亚型的免疫组织化学分析”J.Comp.Neurol.. 431. 228-239 (2001)

Lobov,I.B.: "Specific interaction of mouse major satellite with MAR-binding protein SAF-A."Eur.J.Cell Biol.. 79. 839-849 (2000)

Lobov，I.B.：“小鼠主要卫星与 MAR 结合蛋白 SAF-A 的特异性相互作用。”Eur.J.Cell Biol.. 79. 839-849 (2000)

筒井 研(分担執筆): "廣川タンパク質化学 第4巻 酵素 DNA トポイソメラーゼ(分担課題)"廣川書店. 336(11) (2003)

Ken Tsutsui（撰稿人）：“广川蛋白质化学第 4 卷酶 DNA 拓扑异构酶（合著者）”广川书店 336(11) (2003)。