ras遺伝子産物とその標的蛋白質の相互作用の機構

ras基因产物与其靶蛋白相互作用的机制

• 批准号: 02262224
• 负责人: 片岡 徹
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262224/
• 关键词: ras遺伝子; がん遺伝子; アデニル酸シクラ-ゼ; GTP結合蛋白質; サイクリックAMP; 反復配列; 出芽酵母

1 出芽酵母アデニル酸シクラ-ゼの<ras>___ー相互作用部位の同定:出芽酵母アデニル酸シクラ-ゼ遺伝子に種々の欠損および2アミノ酸挿入変異を導入して<ras>___ー蛋白による活性化に対する影響を調べた所,シクラ-ゼ中央部の600残基を占めPXXαXXLXXLXXLXLXXNXαXXα(P:プロリン,L:ロイシン,N:アスパラギン,α:脂肪族アミノ酸,X:アミノ酸不特定)という23残基の反復より構成される領域(Leucineーrich repeatsと呼ぶ)が<ras>___ー蛋白との相互作用に必須である事が判明した。Leucineーrich repeatsは,その中の何処の部位に2アミノ酸の挿入を行っても<ras>___ー蛋白との反応性が完全に破壊されるので、たぶん非常にrigidな超立体構造をとっていると考えられた.更に,repeatsの単位配列に点突然変異を導入し1アミノ酸の置換を行った所、単位配列コンセンサス配列中のロイシンが一定の間隔をおいて存在する事が重要である事が判明した。以上の結果はLeucineーrich repeatsがロイシンジッパ-配列のように蛋白質一蛋白質間の相互作用に必要な配列である事を示唆した。更にLeucineーrich repeats部の後半200残基の領域に,<ras>___ー蛋白のエフェクタ-結合領域に結合するとされる<ras>___ーの調節蛋白質GAP,NFー1と配列の相同性が発見されたので,この領域が<ras>___ー蛋白の結合部位であると考え現在徹底的に点突然変異を導入して解析を行っている。2 出芽酵母と分裂酵母のアデニル酸シクラ-ゼ分子間のキメラの作製:上記2種類の生物の<ras>___ー蛋白との反応性の異なるアデニル酸シクラ-ゼ分子間のキメラを作製して解析した所,出芽酵母シクラ-ゼのLeucineーrich repeatsを含む領域を,<ras>___ー蛋白によって制御されない出芽酵母シクラ-ゼ活性ドメインに連結すると<ras>___ー蛋白に対する反応性が賦与される事が判明した。以上の結果は我々が提唱する“出芽酵母シクラ-ゼの<ras>___ー相互作用ドメインが進化の過程で転位して別の蛋白質へ連結された"というモデルを支持している。

1 Budding yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ - ゼ の < ras > ___ ー parts の interaction with: budding yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ - ゼ heritage 伝 に kind son 々 の owe loss お よ び 2 ア ミ ノ acid scions into - different を import し て < ras > ___ ー protein に よ る activeness に す seaborne る influence を adjustable べ た, シ ク ラ - the central part ゼ の 600 residues を め PXX alpha XXLXXLXXLXLXXNX alpha XX alpha (P: プ ロ リ ン, L: ロ イ シ ン, N: ア ス パ ラ ギ ン, alpha: aliphatic ア ミ ノ acid, X: ア ミ ノ acid is not specific) と い う 23 residues の repeatedly よ り constitute さ れ る areas (Leucine ー rich repeatsと call ぶ)が<ras>___ が protein と <s:1> interaction に must be determined by である and が to identify た. Leucine ー rich repeats は, そ の what 処 の の parts に 2 ア ミ ノ acid の scions into line を っ て も < ras > ___ ー protein と の anti 応 sex が に completely broken 壊 さ れ る の で, た ぶ ん very に it rigid な ultra three-dimensional structure を と っ て い る と exam え ら れ た. More に, repeats の 単 a match column に suddenly - different を import し 1 ア ミ ノ acid の line displacement を っ た, 単 match column by コ ン セ ン サ ス match column の ロ イ シ ン が certain の interval を お い て exist す る matter が important で あ る matter が.at し た. の above results は Leucine ー rich repeats が ロ イ シ ン ジ ッ パ - match column の よ う に protein の interaction between a protein に な necessary assortment で あ を る things in business し た. And にLeucine に rich Repeats of half 200 residues after の に の areas, < the ras > ___ ー protein の エ フ ェ ク タ - combining field に す る と さ れ る < ras > ___ ー の GAP regulating protein, NF ー と match column 1 の identity が 発 see さ れ た の で, こ が の field < ras > ___ の ー protein binding site で あ る と え now A complete に point suddenly changes を import て て parse を line って る る る. 2 budding yeast と split yeast の ア デ ニ ル acid シ ク ラ - ゼ intermolecular の キ メ ラ の cropping: written 2 kinds の biological の < ras > ___ ー protein と の anti 応 sex の different な る ア デ ニ ル acid シ ク ラ - ゼ intermolecular の キ メ ラ を cropping し て parsing し た, budding yeast シ ク ラ - ゼ の Leucine ー rich Repeats を contain を む field, < the ras > ___ ー protein に よ っ て suppression さ れ な い budding yeast シ ク ラ actiity ゼ ド メ イ ン に link す る と < ras > ___ ー protein に す seaborne る anti 応 が fu and さ れ る matter が.at し た. Above の results は my 々 が mention sing す る "budding yeast シ ク ラ - ゼ の < ras > ___ ー interaction ド メ イ ン で が の evolution process planning a し て don't の protein へ link さ れ た" と い う モ デ ル を support し て い る.

项目成果

片岡 徹: "<ras>___ー蛋白とアデニル酸シクラ-ゼ" 実験医学(増刊号). 8. 165-168 (1990)

Toru Kataoka：“<ras>___-蛋白质和腺苷酸环化酶”实验医学（特刊）。8. 165-168 (1990)。

Noboru Suzukiら: "Leucineーrich repeats and carboxyl terminus are required fof interaction of yeat adenylate cyclase with <RAS>___ー proteins." Proceeding of the National Academy of Sciences,USA. 87. 8711-8715 (1990)

Noboru Suzuki 等人：“酵母腺苷酸环化酶与 <RAS>___-蛋白质相互作用需要富含亮氨酸的重复序列和羧基末端。”美国国家科学院院刊，87. 8711-8715 (1990)。

J.Fieldら: "Cloning and Characterization of <CAP>___ー,the S__ー.<cerevisiae>___ー Gene Encoding the 70kd Adenylyl CyclaseーAssociated Protein." Cell. 61. 319-327 (1990)

J. Field 等人：“<CAP>____，S___。<酿酒酵母>____ 编码 70kd 腺苷酸环化酶相关蛋白的基因的克隆和表征。细胞”。 ）