ras遺伝子産物とその標的蛋白質の相互作用の機構

ras基因产物与其靶蛋白相互作用的机制

• 批准号: 04253228
• 负责人: 片岡 徹
• 金额: $ 7.68万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04253228/
• 关键词: rasがん遺伝子; GTP結合蛋白質; rafがん遺伝子; アデニル酸シクラーゼ; 出芽酵母; 線虫; ゲルゾリン; アクチン結合蛋白質; ras蛋白質; シクラーゼ結合蛋白質; CAP; C.elehans

我々の研究目的は,Ras蛋白質とその標的蛋白質との相互作用の機構の解析であり,昨年度までは標的蛋白質として唯一判明していた出芽酵母アデニル酸シクラーゼのみを対象としていたが,本年度になり高等動物ではRaf蛋白質がRasの標的蛋白質である可能性が判明したので,Raf蛋白質との相互作用の機構も解析した。1.酵母アデニル酸シクラーゼとRafの間にはアミノ酸配列の類似性が見られないので,両者の間でRas蛋白質上の結合認識部位が異なっている可能性について解析した。まず、ヒトRaf蛋白質制御領域と出芽酵母アデニル酸シクラーゼのleucine-rich repeats領域が、Ras蛋白質によるシクラーゼの試験管内活性化を競合阻害する事を発見し、その反応速度論的解析から両者がRasと直接的結合する事を証明し、Rasに対する解離定数を求め得た。また、両者の結合にRasの翻訳後修飾に対する要求性において大きな違いが有る事を発見した。2.酵母アデニル酸シクラーゼ結合蛋白質CAPの機能を解析し、正常型Rasとシクラーゼの相互作用には必要ではないが、活性型Rasによる異常な表現形質の発現には必要である事を示した。CAPをシクラーゼから引き離す事により、正常型Rasの作用に影響を与えずに活性型Rasの作用を抑制できる事を証明した。3.我々が線虫C.elegansにおいて,出芽酵母アデニル酸シクラーゼのRas蛋白質結合部位leucine-rich repeatsのホモログとして同定したゲルゾリン類似蛋白質の構造および機能解析を行った。この蛋白質がRas蛋白質と結合するかを調べた所、未だpreliminaryではあるがGTP結合型Ras蛋白質と結合する事がわかった。また、この蛋白質は兎アクチンとCaイオン非依存性に結合した。この結果から、この蛋白質が線虫におけるRasの標的蛋白質の一つで細胞骨格の調節に関与している可能性を考え、遺伝学的に機能解析を行っている。

I 々 の は research purpose, Ras proteins と そ の target protein と の interaction の institutions の parsing で あ り, yesterday's annual ま で は target protein と し て only beg the し て い た budding yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ の み を like と seaborne し て い た が, this year's に な り higher animals で は Raf protein が Ras の target protein で あ る possible Sexuality が determination of た で で,Raf protein と <s:1> interaction <e:1> mechanism analysis of た た. 1. Yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ と Raf の between に は ア ミ ノ acid with column の similarity が see ら れ な い の で, who struck between の で Ras proteins recognize の combining site が different な っ て い る possibility に つ い て parsing し た. Youdaoplaceholder0, ヒトRaf protein control field と budding yeast アデニ アデニ acid シ ラ ラ ゼ ゼ <s:1> leucine-rich が repeats field, Ras protein に よ る シ ク ラ ー ゼ の activeness を competition test tube resistance against す る matter を 発 し, そ の anti 応 speed theory of analytic か ら struck the が Ras と combination of direct す を prove し る, Ras に す seaborne る dissociation constant た め を o. ま た, struck の combining に Ras の modification after turn 訳 に す seaborne る に sex お い て big き な violations い が る things を 発 see し た. 2. Yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ binding protein function of CAP の を analytical し, normal type Ras と シ ク ラ ー ゼ の interaction に は necessary で は な い が type, active Ras に よ る abnormal な performance character の 発 now に は necessary で あ を る things in し た. CAP を シ ク ラ ー ゼ か ら about their す き に よ り, normal Ras の effects に を and え ず に type active Ras の を restrain で き を る things prove し た. 3. I 々 が worm c. elegans に お い て, budding yeast ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ の Ras protein binding site leucine - rich repeats の ホ モ ロ グ と し て with fixed し た ゲ ル ゾ リ ン similar protein の tectonic お よ び line function analytical を っ た. こ の protein が Ras proteins と combining す る か を adjustable べ た, not だ by preliminary で は あ る が GTP type combined with Ras proteins made と combining す る matter が わ か っ た. Youdaoplaceholder0, <s:1> <s:1> proteins ア rabbit ア チ チ チ と とCa <s:1> と <s:1> non-dependent に binding た た. こ の results か ら, こ の protein が nematodes に お け る Ras protein の の mark a つ で cell bone の regulation に masato and し て い る possibility を え test, but 伝 learn に functional analytic line を っ て い る.

项目成果

J.Wang et al.,: "Analysis of the function of the 70-kilodalton cyclase-associated protein(CAP)by using mutants of yeast adenylyl cyclase defective in CAP binding." Mol.Cell.Biol.13. 4087-4097 (1993)

J.Wang 等人：“利用 CAP 结合缺陷的酵母腺苷酸环化酶突变体分析 70 千道尔顿环化酶相关蛋白 (CAP) 的功能。”

N.Suzuki et al.,: "Antibody mimicking the action of RAS proteins on yeast adenylyl cyclase:implication for RAS-effector interaction." Mol.Cell.Biol.13. 769-774 (1993)

N.Suzuki 等人：“模拟 RAS 蛋白对酵母腺苷酸环化酶作用的抗体：对 RAS 效应子相互作用的影响。”

J.Wang: "The 70-kilodalton adenylyl cyclase-asscociated protein is not essential for interaction of sacharomyces cerevisiae adenylyl cyclase with RAS proteins." Mol.Cell.Biol.12. 4937-4945 (1992)

J.Wang：“70 千道尔顿腺苷酸环化酶相关蛋白对于酿酒酵母腺苷酸环化酶与 RAS 蛋白的相互作用并不是必需的。”

J.Wang: "Analysis of the function of 70-kilodalton CAP by using mutants of yeast adenylyl cyclase defective in CAP-binding." Mol.Cell.Biol.13. (1993)

J.Wang：“利用 CAP 结合缺陷的酵母腺苷酸环化酶突变体分析 70 千道尔顿 CAP 的功能。”

N.Suzuki: "Antibody mimicking the action of RAS proteins on yeast adenylyl cyclase:Implication for RAS-effector interaction." Mol.Cell.Biol.13. 769-774 (1993)

N.Suzuki：“模拟 RAS 蛋白对酵母腺苷酸环化酶作用的抗体：对 RAS 效应子相互作用的影响。”