ras癌遺伝子産物を分子標的とした新規抗癌剤開発を目指した基礎的研究

旨在开发针对ras癌基因产物的新型抗癌药物的基础研究

• 批准号: 06F06238
• 负责人: 片岡 徹
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06238/
• 关键词: 低分子量G蛋; ras癌遺伝子; X線結晶解析; インシリコ創薬; 低分子量G蛋白質

M-Ras及びM-RasのH-Ras型アミノ酸置換変異体の高次構造解析により決定した、GTP結合型ながら標的蛋白質との結合能力を持たない型(state 1)の高次構造情報にもとづき、バーチャル化合物ライブラリーから、NEC独自のMMPBSA法によるドッキングシミュレーションによって、state 1のポケットにエネルギー的に安定に結合する可能性が高いと予想された100種類の候補化合物を購入した。これら候補化合物によるM-Ras変異体-GTPならびにH-Ras-GTPとRafとの結合阻害試験を行った結果、H-Rasに対してRas-Raf結合を強く抑制するヒット化合物kobe0065が得られた。また、kobe0065存在下でH-Ras-GTP(GppNHp)の^<31>P-NMR測定を行なったところ、化合物非存在下での測定結果と比較してstate 1の存在割合が優位に増加していた。この結果は、kobe0065がH-Rasの遷移をstate 1側へずらしstate 1の安定化をはかることにより、Ras-Raf結合を抑制する活性を有することを強く示唆していた。さらに、kobe0065の構造情報に基づき、Tanimoto係数を使用して選抜した50種類の構造類似化合物を用いて同様の試験管内Ras-Raf結合阻害試験を行なった結果、H-Rasに対してkobe0065と同程度の活性を示す3種類のヒット化合物kobe2601,kobe2602,kobe2649が得られた。いずれもkobe0065と同様に濃度依存性のRas-Raf結合阻害活性を示した。kobe0065を含む4種類のヒット化合物の間には共通の母核構造が確認されている。なお、4種類の化合物存在下で、活性型H-ras遺伝子を導入した癌化細胞株NIH3T3細胞のコロニー形成能力を調べたところ、ヒット化合物の癌化形質抑制活性を確認した。

The protein binding ability of M-Ras and M-Ras H-Ras type antigens was determined by high-order analysis, and the protein binding ability of the combined type of GTP (state 1) was analyzed. The results showed that the protein binding ability of the combined type of DNA was higher than that of the control group (state 1). The combination of diazepam and diazepam in state 1 is highly likely to induce the introduction of more than 100 candidate compounds. The candidate compound M-Ras-GTP-H-Ras-GTP-Raf was used in combination with the blocking agent to analyze the results, and the combination of H-Ras and Ras-Raf strongly inhibited the growth of the compound kobe0065. In the presence of H-Ras-GTP (GppNHp) ^ & lt;31>P-NMR and in the absence of compounds, the results show that there is a cut-off position in the presence of H-Ras-GTP (GppNHp) ^ and lt;31>P-NMR in the absence of compounds. The results showed that state 1, Ras-Raf combined with inhibition activity were strongly indicated by the results of the test. The results of experiments, kobe0065, kobe0065, and Tanimoto data show that the kobe2601,kobe2602,kobe2649 compounds of class 3 have been successfully tested by using the combination of Ras-Raf in the same tube and the same degree of activity. The degree of dependence of kobe0065 was the same as that of Ras-Raf and the inhibitory activity was demonstrated. Kobe0065 contains four kinds of compounds, which are common to the mother nucleus to make sure that it is not true. The presence of malonium and 4 compounds, the introduction of active H-ras spores into the cancer cell line NIH3T3 cells, the formation ability of cancer cells, and the confirmation of carcinogenesis inhibitory activity of antitumor compounds.

项目成果

Two conformational states of Ras GTPase exhibit differential GTP-binding kinetics

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2008.01.169
• 发表时间: 2008-05-02
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Liao, Jingling;Shima, Fumi;Kataoka, Tohru
• 通讯作者: Kataoka, Tohru

Conformational equilibrium of small GTPases and signal transduction

小 GTP 酶的构象平衡和信号转导

• 发表时间: 2007
• 作者: Ijiri;et. al.
• 通讯作者: et. al.