ヒト染色体デイセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子 単離と腫瘍抑制機構

人类染色体解剖分离外生骨疣（抑癌）基因及抑癌机制

• 批准号: 03258232
• 负责人: 新川 詔夫
• 金额: $ 4.35万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03258232/
• 关键词: 外骨腫遺伝子; DNAライブラリ-; 欠失分析; PFGE; 8g23ー24特異的クロ-ン

<1. 8q23ーq24(外骨腫遺伝子座領域)特異的DNAライブラリ-の作製>___ー:平成2年度の研究で確立した染色体顕微切断・PCR・マイクロクロ-ニング法を用いて、8q23ーq24領域の染色体断片から計3.5×10^4のクロ-ンから成る当該領域プラスミド(puC)ライブラリ-を作製した。PCR産物はin situ hybridizationにより当該領域にマップされた。<2. 各pUCクロ-ンの性格>___ー: ヒト・マウス雑種細胞パネルを用いたサザン解析により、解析した60個(平均352bp)中、12(20%)クロ-ンはユニ-ク配列、1個はユニ-クと反復両配列をもつもの、25個は反復配列のみ、残りの22個はシグナルなしであった。この12個のユニ-ククロ-ンではPFLPは検出されなかった。<3. ファ-ジ(ph)クロ-ンの取得>___ー:ファ-ジライブラリ-を500bpのユニ-クpUCクロ-ンで選択し、9.4Kbのinsertをもつphクロ-ンを得た。<4. TRPS患者における欠失解析>___ー:12個のpUCクロ-ン中8個とphクロ-ンをプロ-ブとし、2名の患者(1例はTRPSI、1例はTRPSII)で欠失分析を行った。4個のpUCクロ-ンは両患者で1コピ-濃度(欠失内部)を示した。phクロ-ンのHindIII消化サブクロ-ンも1コピ-濃度を示した。残りのpUCクロ-ン4個は2コピ-濃度(欠失外部)を示した。<5. PFGE解析>___ー: phクロ-ンをプロ-ブとして用い、正常ヒトおよびTRPSIとTRPSII患者DNAを4種の希有切断酵素で消化し、PFGE解析を行い、550kbのNotl断片、500kbのMlul断片、450kb/400kb(多分RFLP)のClal断片、および200kbのSall断片を検出した。患者と正常人の断片長差はみられなかった。本年度の研究で得たクロ-ン化DNAは外骨腫遺伝子座位近傍にはあるが、依然双方間に距離がある。外骨腫遺伝子に到達するには、更に多数のクロ-ンの解析を続行する必要がある。

<1. Creation of DNA raiblari specific to 8q23-q24(exostosis locus field)>__-: Research in 2012 established that the use of chromosome microdissection·PCR·microcloning method has resulted in the creation of a 3.5×10^4 microcloning of chromosome fragments in the 8q23-q24 field when the prasumi (puC) raiblari-was created in this field. PCR products are in situ hybridization. <2. Each pUC has a character>___ The 12 PFLP's are not the same. <3. The first step is to select a 500bp, 9.4Kb insert from the list of 500bp, 9.4Kb insert from the list of 500bp, 9.4Kb insert from the list of 5000bp, 9.4Kb insert from the list of 500bp, 9.4Kb insert from the list of 500bp, 9.4Kb insert from the list of 50 <4. TRPS patients missed analysis>____: 8 of 12 pUC patients missed analysis, 2 patients missed analysis (1 TRPSI, 1 TRPSII). 4 pUC-related patients 1 pUC-related concentration (missing internal) pH-1 HindIII Digestion-1 Concentration The residual pUC-N 4 2-Concentration (missing external) is indicated. <5. PFGE analysis>___: The DNA of patients with PHR-1, TRPSI and TRPSII was digested by four rare cutting enzymes, PFGE analysis was performed, 550kb Notl fragment, 500 kb Mlul fragment, 450kb/400kb(multi-RFLP) Clal fragment, and 200kb Sall fragment were detected. The patient and normal person's break length difference is not good. This year's research has found that the distance between the two sides of the DNA is still close. It is necessary to analyze most of the data in order to achieve the desired results.

项目成果

Deng HーX,et al.: "chromosome handーspecific painting:chromosome in situ sppression hybridization using PCR products from a microdissected chromosome hand as a probe pool." Human Genetics(1992).(1992)

Deng H-X 等人：“染色体手特异性绘制：使用来自显微解剖染色体手的 PCR 产物作为探针池的染色体原位抑制杂交（1992）。”

Jinno Y,et al.: "A simple and efficient amplification method of DNA with unknown sequences and its application to the microdissection/microcloning." Journal of Biochemistry(1992).(1992)

Jinno Y 等人：“一种简单有效的未知序列 DNA 扩增方法及其在显微切割/微克隆中的应用。”

陣野 吉廣,新川 詔夫: "染色体切断法を用いた遺伝子解析技術の開発" 代謝(増刊号)「癌 '91」. 28. 171-177 (1991)

Yoshihiro Jinno、Akio Shinkawa：“使用染色体切割方法的基因分析技术的开发”Metabolism（特刊）“Cancer 91”（1991）。

Hirota T,et al.: "Microdissection of human chromosomal regions 8q23.3ーq24.11 and 2q33ーqter:Construction of DNA libraries and isolation of their clones." Genomics(1992).(1992)

Hirota T 等人：“人类染色体区域 8q23.3-q24.11 和 2q33-qter 的显微解剖：DNA 文库的构建及其克隆的分离。（1992）。”

新川 詔夫: "渋谷 正史編「がんのバイオサイエンスI:がん遺伝子と抑制遺伝子」“染色体とがん関連遺伝子" 東京大学出版会, 143 (1991)

新川昭夫：“癌症生物科学 I：癌症基因和抑制基因”，涉谷正史编辑，“染色体和癌症相关基因”，东京大学出版社，143（1991）