ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

通过人类染色体解剖分离外生骨疣（抑癌基因）基因及抑癌机制

• 批准号: 04253233
• 负责人: 新川 詔夫
• 金额: $ 6.85万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04253233/
• 关键词: 多発性外骨腫症遺伝子; ポジショナルクローニング; 転座切断点; YACクローン; FISH; 外骨腫症; 原因遺伝子; 逆行遺伝学; マッピング; PFGE; BMP-1遺伝子

本研究は特殊な症例〔t(8q;13q)を伴った多発性外骨腫症(EX)孤発例〕から逆行遺伝学的方法によりEX遺伝子を単離することを目的とした.本年度は以下の結果を得た.(1)8q23にマップされるコスミドクローンを用いたFISH解析により判明した7種のクローンの8q23領域中の配列順序はcen/cCI8-1185/cCI8-1148/cCI81435/cCI8553/cCI81512/cCI8-1122/cCI81173/telであった.このうち4クローンは8q上の切断点より近位に他の4種は遠位にマップされ、cCI8-553とcCI8-1512が切断点に最も近接していることが判明した.(2)cCI8-553とcCI8-1512を用いたPFGE解析により,患者のみに約950kbのextra bandを検出した.cCI8-1512で検出される断片は切断点から600kb以内であった.(3)cCI8-1512を基にYACライブラリーのスクリーニングを行い,yck8-90YACクローンを得た.yck8-90を用いた患者染色体によるFISHでは,正常の8番染色体の他に2つの転座派生染色体の切断点付近に蛍光シグナルを認めた.このことは切断点部位はyck8-90中に含まれていることを示す.(4)yck8-90のEcoRI消化のサブクローニングにより切断点をカバーする9種のサブクローンを得た.そのうち5′側の4.3kb断片を用いた通常のサザン解析で患者DNAにextra bandを検出した.即ち切断点はこの4.3kb中に含まれる.(5)4.3kb断片に対応するcDNAはまだ検出されていない.切断点自体が巨大なintron中にある可能性や、切断点近傍になにか重要な配列があるのかは今後の課題である。YACは完全に切断点をカバーしているので、このYACの解析を進める予定である。

The purpose of this study is to investigate the method of retrograde genetics for a special case of multiple exostosis (EX). The following results were obtained for the year. (1) FISH analysis of 8 q23 field shows that the order of arrangement of 7 species in 8 q23 field is cen/cCI8 - 1185/cCI8 - 1148/cCI81435/cCI8553/cCI81512/cCI8 - 1122/cCI81173/tel. 4 kinds of opposite distant positions: cCI8 - 553 and cCI8 - 1512 are close to the cutting point on 8 q. (2) cCI8 - 553 and cCI8 - 1512 are used in PFGE analysis, and the patient's heart is about 950 kb and the extra band is detected. cCI8 - 1512 is detected and the fragment is cut within 600 kb. (3) cCI8 - 1512 gene base YAC gene mutation detection, yck8 - 90 YAC mutation detection. yck8 - 90 gene base YAC mutation detection, yck8 - 90 gene base YAC mutation detection The position of the cutting point is yck 8 - 90. (4) yck8 - 90 EcoRI elimination of the cut point of 9 kinds of support. A 4.3kb fragment on the 5 ′ side of the DNA fragment was detected. That is, the cut point contains. (5) The cDNA fragment of 4.3 kb fragment was isolated from the genome. The possibility of cutting off the point itself is huge. The problem of cutting off the point is important. YAC is completely cut off point, YAC analysis is advanced.

项目成果

Kawano A,Mitranqura A,Dittrich B,et al.: "Molecular dissechan of the Prader-willi/Angelman rhuduome ergion(15-q11-13)by YAC clouing and FI8H analysis." Humen Molecular Geuetics. 1. 417-425 (1992)

Kawano A、Mitranqura A、Dittrich B 等人：“通过 YAC 克隆和 FI8H 分析对 Prader-willi/Angelman rhuduome ergion (15-q11-13) 进行分子分析。”

Yoshiura K, et al.: "Mapping of the 8q translocation breakpoint of t(8;13) observed in a patient with multiple exostoses." Genes Chrom Cancer. 9. 57-61 (1994)

Yoshiura K 等人：“在多发性外生骨疣患者中观察到的 t(8;13) 8q 易位断点图谱。”

Jimd Y,Harada N,Yoshiura K,et al.: "A simple and efficient amplification method of DNA with unkuown Sequeuces and its appication to the microdissechion-microcloning." Journsl of Biochemestry. 112. 75-80 (1992)

Jimd Y,Harada N,Yoshiura K,et al.：“一种简单有效的具有未知序列的 DNA 扩增方法及其在微分离-微克隆中的应用。”

Hirota T,Tsukamoto K,Deng H-X,et al.: "Microdissection of human cbromosomal regious 8q23.3q24.11 and 2q33-qter:Constyctin of DNA libratios and ciolation of their clones." Genomics. 13. 349-354 (1992)

Hirota T、Tsukamoto K、Deng H-X 等人：“人染色体区域 8q23.3q24.11 和 2q33-qter 的显微解剖：DNA libratios 及其克隆的 Constyctin。”

Yoshiwa K,Jinsuo Y,Niikawa N: "Assignment of human fone ncorphogenetic prstein 1 geme to 8p21:Exclusion as a candidste for bome dyoulasca in multiple eostoses." Catogenetics and cell Geuetics. (1993)

Yoshiwa K、Jinsuo Y、Niikawa N：“人类 fone ncorphogenesis prstein 1 geme 到 8p21 的分配：排除作为多发性骨质增生中 Bome dyoulasca 的候选者。”