希土類錯体を利用した新しい薬物レセプターアッセイ法の開発

利用稀土配合物开发新的药物受体测定方法

• 批准号: 06241219
• 负责人: 竹内 俊文
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Hiroshima City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06241219/
• 关键词: 希土類錯体; 時間分解蛍光法; レセプターアッセイ; ベンゾジアゼピン; 非放射性

(1)ベンゾジアゼピン(Bz)の一種である1012-Sを用いてユーロピウム標識Bz(Eu-1012-S)の調製を行ったところ、Eu-1012-Sは、塩基性条件下で、Eu錯体標識試薬と混合することにより簡便に調製可能であった。(2)Schatchard analysisの結果、Eu-1012-Sの解離定数は1.2nMと推定された。このことより、Eu-1012-Sが、レセプターに対し十分高い親和性があることがわかった。(3)時間分解蛍光レセプターアッセイの標準操作法を以下のように定めた:Bzレセプター懸濁液(10mMリン酸緩衝液pH7.4)200μlに、試料Bz系薬物溶液(蒸留水又は含水メタノール)25μlと7.5nM Eu-1012-S溶液(10mMリン酸緩衝液pH7.4)25μlを加え、室温で1時間放置する。遠心分離にてB/F分離した後、その上清25μlをとり、あらかじめ96穴マイクロタイタ-プレートに200μlずつ入れてある蛍光増強試薬に加え、5分間振盪して時間分解蛍光計で蛍光強度を測定する。Bzレセプターアッセイの結果、Bz系薬物は、Bzレセプターに対する親和性の高さの順に、Eu-1012-Sのレセプターへの結合を阻害し、S字型の阻害曲線が得られた。また、測定液中のバックグランド蛍光は、マイクロタイタ-プレート自身の蛍光強度のわずか2倍と極めて低くかった。従って、時間分解蛍光法を用いることにより、従来の蛍光レセプターアッセイで妨害の大きかったレセプター懸濁液由来のバックグランド蛍光の影響をほとんど受けずに蛍光リガンドの定量が可能であることがわかった。以上の結果から、時間分解蛍光法を用いることにより、従来法に比べて簡便な操作で、高感度にBz系薬物のレセプターアッセイが可能であることが示された。

(1) ベ ン ゾ ジ ア ゼ ピ ン (Bz) の a で あ る を 1012 - S with い て ユ ー ロ ピ ウ ム logo Bz (Eu - 1012 - S) line の modulation を っ た と こ ろ は, Eu - 1012 - S, under the condition of salt basic で, Eu misprinted id try 薬 と mixed す る こ と に よ り simple に modulation may で あ っ た. (2) The Schatchard analysis <e:1> results and the <s:1> dissociation rule of Eu-1012-S, which is 1.2nMと, are presumed to be された. <s:1> <s:1> とよ, Eu-1012-Sが, レセプタ レセプタ に に have a very high <s:1> affinity for とがわ とがわ とがわ とがわ った った った. (3) the time decomposition 蛍 light レ セ プ タ ー ア ッ セ イ の standard operation under を の よ う に set め た : Bz レ セ プ タ ー suspensions (10 mm リ ン pH7.4 slightly acid buffer) 200 mu l に, try Bz series 薬 content solution (evaporate and leave the water は aqueous メ タ ノ ー ル) 25 mu l と 7.5 nM Eu-1012-S solution (10 mm リ <s:1> acid buffer pH7.4)25μlを plus え, room temperature で1 time する. Telecentric separation に し て B/F separation, after た そ の on 25 mu qing l を と り, あ ら か じ め 96 hole マ イ ク ロ タ イ タ - プ レ ー ト に 200 mu l ず つ into れ て あ る 蛍 light raised strong try 薬 に え, five points between oscillation し て time decomposition 蛍 light meter で 蛍 light intensity を determination す る. Bz レ セ プ タ ー ア ッ セ イ の results, Bz は 薬 minerals, Bz レ セ プ タ ー に す seaborne る affinity の high さ の shun に, Eu - 1012 - S の レ セ プ タ ー へ の combining を resistance against し, S type の hindered harm curve が ら れ た. ま た, determination of fluid in the の バ ッ ク グ ラ ン ド 蛍 は, light マ イ ク ロ タ イ タ - プ レ ー ト itself の 蛍 light intensity の わ ず か 2 times と extremely め て low く か っ た. を 従 っ て 蛍 light, time decomposition method with い る こ と に よ り, 従 の 蛍 light レ セ プ タ ー ア ッ セ イ で sabotage の big き か っ た レ セ プ タ ー suspension origin の バ ッ ク グ ラ ン ド 蛍 light の influence を ほ と ん ど by け ず に 蛍 light リ ガ ン ド の quantitative が may で あ る こ と が わ か っ た. の above results か ら 蛍 light, time decomposition method を with い る こ と に よ り, 従 to に than べ て simple operation な で, Gao Gan に Bz 薬 minerals の レ セ プ タ ー ア ッ セ イ が may で あ る こ と が shown さ れ た.