哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究

参与哺乳动物细胞 DNA 复制的 DNA 解旋酶的分子遗传学和生化研究

• 批准号: 06247204
• 负责人: 榎本 武美
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06247204/
• 关键词: DNAヘリカーゼ; DNA複製; プライマーRNA合成; 一本鎖DNA結合蛋白; 哺乳類細胞; 温度感受性変異株; cDNA

DNA複製という細胞増殖に必須な基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻戻されて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻戻し酵素(DNAヘリカーゼ)により遂行される。昨年度、DNA複製の温度感受性変異株を分離し解析することにより、DNAヘリカーゼBが哺乳類細部のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを明らかにした。原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘイカ-ゼの多くのものがプライマーゼ活性を促進することから、本年度はDNAヘリカーゼBのDNAプライマーゼ活性に及ぼす影響を調べるとともに、そのcDNAのクローニングを試みた。1、マウスFM3A細胞から、DNAヘリカーゼB、DNAポリメラーゼα-プライマーゼ、一本鎖DNA結合蛋白質(RP-A)を精製し、DNAポリメラーゼα-プライマーゼのプライマーゼ活性に及ぼすDNAヘリカーゼB、RP-Aの影響を調べたところ、DNAヘリカーゼBはプライマーゼ活性を顕著に促進し、RP-Aは阻害することがわかった。さらに、RP-Aにより阻害されたプライマーゼ活性はDNAヘリカーゼBにより回復することから、DNAヘイカ-ゼBが原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘリカーゼと同様な作用をすることが明らかになり、機能の面からも、DNAヘリカーゼBがDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを示すことができた。2、DNAヘリカーゼBを精製してアミノ酸配列を決め、そのアミノ酸配列をもとにcDNAのクローニングを試み、N末端の一部を除きcDNAをクローニングすることができた。

DNA replication is essential for cell proliferation. This process is carried out by two key DNA enzymes. DNA replication and temperature sensitivity analysis DNA replication in prokaryotic cells is related to cDNA replication, and cDNA replication in prokaryotic cells is related to cDNA replication. 1. FM3A cell culture, DNA diversity, α-diversity, one-dimensional DNA binding protein (RP-A) purification, DNA diversity, α-diversity, activity, DNA diversity, B, RP-A influence, DNA diversity, activity, promotion, RP-A inhibition DNA replication in prokaryotes is related to DNA replication in RP-A. 2. DNA purification and sequencing. DNA sequencing. N-terminal sequencing.