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哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究

参与哺乳动物细胞 DNA 复制的 DNA 解旋酶的分子遗传学和生化研究

基本信息

批准号：
04256208
负责人：
榎本武美
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04256208/
关键词：
DNAヘリカーゼ DNA複製哺乳類細胞温度感受性変異株

项目摘要

DNA複製という細胞増殖の基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻きもどされて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻きもどし酵素(DNAヘリカーゼ)により進行される。哺乳類細胞のDNA複製機構やその開始機構を分子レベルで理解するためにはDNA複製に関与するDNAヘリカーゼを同定することが必須である。本研究ではDNAヘリカーゼがDNA依存性ATPase活性をもつことからDNA依存性ATPase活性を指標に、哺乳類細胞のDNA合成の温度感受性変異株を用いて、DNAヘリカーゼの変異株をスクリーニングし、以下のような結果を得た。(1)マウスFM3A細胞のDNA合成の温度感受性変異株をスクリーニングし、tsFT848株では非許容温度でDNAヘリカーゼBの活性が低下することを見出した。(2)この株ではヘリカーゼBが変異蛋白の本体であり、ヘリカーゼBが細胞増殖に必須であることが示唆された。(3)tsFT848細胞では非許容温度で細胞周期の進行が停止し、その主な停止点はS期初期であった。(4)非許容温度下で培養したtsFT848細胞では、DNA合成の低下と、DNAヘリカーゼBの活性の低下との間に相関がみられた。(5)DNAファイバーオートラジオグラフィーによる解析の結果、tsFT848細胞の非許容温度下でのDNA合成の低下はレプリコンレベルでのDNA複製開始頻度の低下によることが明らかになった。以上から、DNAヘリカーゼBが哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることが強く示唆された。

DNA replication is the basic process of cell reproduction. This process is carried out in two ways: DNA sequencing and enzyme sequencing. The DNA replication machinery of mammalian cells is essential for understanding the molecular mechanisms involved in DNA replication. In this study, DNA dependent ATPase activity was measured as an indicator of DNA synthesis and temperature sensitivity in mammalian cells, DNA dependent ATPase activity was measured as an indicator of DNA synthesis and temperature sensitivity in mammalian cells. (1)The temperature sensitivity of DNA synthesis in FM3A cells was investigated. (2)This is the first time I've ever seen one. (3) TsFT848 cells are not allowed to undergo cell cycle arrest at temperature, and the main arrest point is at the beginning of S phase. (4)FT848 cells were cultured at elevated temperatures, and DNA synthesis and activity decreased. (5)DNA synthesis in tsFT848 cells at non-allowable temperatures was reduced due to the analysis of DNA replication. DNA replication in mammalian cells