アフリカツメガエル卵無細胞系における核構造に依存したDNA複製開始機構

爪蟾卵无细胞系统中核结构依赖性DNA复制启动机制

• 批准号: 06247210
• 负责人: 滝澤 温彦
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06247210/
• 关键词: アフリカツメガエル卵; 無細胞DNA複製系; DNA複製開始機構; 核構造

1.核形成前のDNA複製開始を決定するクロマチン結合タンパク質の同定S期特異的にクロマチンへ結合するタンパク質を同定するため、以下の実験を行った。ツメガエル卵より膜成分を除いた分画を、実験補助により大量に調製した。DNAをS期およびG2期様活性を有する抽出液分画でインキュベートし、DNA結合タンパク質を電気泳動法により分離し、S期特異的にDNAに結合するタンパク質として、分子量11万、10万、9.2万(p110、p100、p92)を同定し、これらタンパク質に対する抗体を作成した。抗p100抗体を用いた免疫沈殿実験により、p110、p92はp100と会合していること、これらのタンパク質は核形成前にDNAに結合し、複製開始反応に必須であることを明らかにした。さらにこれらのタンパク質は、核形成後の複製反応開始によってクロマチンから遊離することを見出した。他方、DNA鎖の伸長に必要なポリメラーゼ等の一群のタンパク質因子は、複製反応時にクロマチンに結合しており、本研究で同定したタンパク質が複製開始に関わる重要な因子であることがわかった。さらにツメガエル卵mRNAより作成したcDNAライブラリーを抗体を用いてスクリーニングを行い、本研究で同定したタンパク質が酵母で複製開始反応に必要とされているMCMファミリーに属することがわかった。2.DNA複製開始に関わるクロマチン構造1で同定したタンパク質が、どのようなクロマチン構造形成に関わっているかを明らかにするため、はじめに単位ヌクレオソームあたりのタンパク質結合量を測定した。S期特異的にクロマチンへ結合しているp100およびコアヒストH4のコピー数を測定した結果、p100・1分子あたりH4約30分子、従って、約15ヌクレオソームあたり1分子のp100が結合していることが示唆された。現在p100が結合しているクロマチンがどのような高次構造を有しているか検討している。

1. DNA replication initiation before nuclear formation is determined by the following procedures: The membrane composition is divided into two parts, namely, the membrane composition is divided into three parts, and the membrane composition is divided into four parts. DNA phase S and G2 phase activity of the extract analysis, DNA binding, electrokinetic separation, S-phase specific DNA binding, molecular weight 110,000, 100,000, 92,000 (p110, p100, p92), the same determination, the preparation of antibodies against DNA binding. Anti-p100 antibodies are used in the immune system. p110 and p92 are used in the immune system. DNA binding and replication are necessary before nuclear formation. In the beginning, the nucleus was formed, and the nucleus was formed. A group of qualitative factors such as other factors and DNA lock elongation are necessary for replication initiation. In this study, the same important factors are determined for replication initiation. In this study, we determined that yeast replication was necessary for the production of cDNA fragments. 2. DNA replication start related to the structure 1, determination of the amount of DNA binding related to the structure formation. The number of H4 molecules in the S phase-specific p100 molecule binding assay was about 30 molecules in the p100 molecule binding assay, and about 15 molecules in the p100 molecule binding assay. Now p100 is combined with higher-order structures.