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真核生物DNA複製開始許可因子の同定

鉴定允许启动真核 DNA 复制的因素

基本信息

批准号：
06262216
负责人：
滝澤温彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06262216/
关键词：
DNA複製開始許可因子真核生物DNA複製

项目摘要

1.ツメガエル卵における複製開始許可因子の同定ツメガエル卵複製開始許可因子の候補として同定した分子量10万のたんぱく質(p100)を認識する抗体をプロテインAセファロースに化学架橋した抗体カラムを調整した。実験補助により大量調製した卵抽出液を用いて、この抗体カラムに結合するタンパク質を精製したところ、p100以外に分子量11万(p110)および分子量9.2万(p92)のタンパク質を精製することができた。これらタンパク質の抗体を作成し、その細胞周期における挙動を調べた結果、p100と同様に核形成前にDNAに結合し、複製反応によって見掛け上不活性されるタンパク質であることがわかった。また、p100抗体を用いてツメガエル卵mRNAより作成した発現cDNAライブラリーをスクリーニングし、p100が出芽酵母でDNA複製開始許可因子の候補と考えられているMCM3のホモログであることを明らかにした。2.哺乳動物におけるDNA複製開始許可因子の同定ツメガエルp100抗体を用いて、ヒト培養細胞で検出されたツメガエルp100のホモログp102の細胞周期における変動を調べた。その結果p102は、ツメガエルp100と同様に、核形成前にDNAに結合し、複製反応によって見掛け上不活性されるタンパク質であることが判明した。またヒトHeLa細胞mRNAより作成した発現cDNAライブラリーをp100抗体を用いてスクリーニングし、p102が、これまでDNAポリラーゼαに会合するタンパク質として同定されていたP1であり、p100と同様に出芽酵母MCM3のヒトホモログであることを明らかにした。

1. Identification of replication start permission factor and adjustment of replication start permission factor candidate with molecular weight of 100,000 and molecular mass (p100). In addition, a large amount of preparation of egg extract solution was carried out, and the antibody was purified by binding with a molecular weight of 110,000 (p110) and a molecular weight of 92,000 (p92). The production of anti-DNA antibodies, the regulation of cell cycle activity, the binding of DNA to p100, and the inactivation of DNA before nuclear formation. The p100 antibody was used to create cDNA fragments from cDNA fragments. The p100 antibody was used to create cDNA fragments from cDNA fragments. 2. Mammalian DNA replication initiation factor identity using antibodies to p100, cell culture and detection of p100 and p102 cell cycle changes in regulation. P102, p100, p102, p103, p104, p105, p106, p107, p107, p108, p108, p109, p109, p109, HeLa cell mRNA was created to detect cDNA fragments from p100 antibodies, and DNA fragments from p102 and p103 were identified.