グルタチオントランスフェラーゼP遺伝子の発現を支配する転写因子のクローニング

谷胱甘肽转移酶P基因表达调控转录因子的克隆

基本信息

批准号：
06261235
负责人：
奥田晶彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06261235/
关键词：
転写エンハンサー cDNAライブラリー肝癌酵母

项目摘要

肝癌特異的に発現するグルタチオンs-トランスフェラーゼ(GST-P)遺伝子の発現は私たちが同定したエンハンサー、GPEIによって支配されている。そこで、GPEIエンハンサーに結合し、GST-P遺伝子の発現を促進する転写因子をクローン化する事を目標に研究を始めた。私たちはまず、酵母の遺伝学を駆使してcDNAのクローン化を目指すことにした。すなわち、HIS3遺伝子に変異を持つ酵母に本来のエンハンサー領域を酵母ではレプレッサーとして働くことが明らかになったGPEIエレメントと置き換えたHIS3遺伝子を導入したところ、この遺伝子からの転写レベルが低いためにこの遺伝子を持つ酵母もHis^-のフェノタイプを示した。そこで、私たちは、さらにこの酵母にcDNAライブラリーを導入すれば、GPEIエレメントに結合する転写因子が発現した場合、その酵母に限ってHis^+のフェノタイプを示すのではないかと考えた。事実、胎児性癌細胞であるF9細胞より調整したcDNAライブラリーをスクリーニングしたところ、His^+のフェノタイプを示す酵母のコロニーが得られた。その酵母からcDNAを回収し塩基配列を決定したところ過去に報告のない新しいクローンであることが明らかになった。得られたcDNAをUTF1と命名したが、生化学的解析から確かにUTF1はHIS3遺伝子からの転写を促進することが明らかになった。但し、DNAへの結合活性が認められないことが明らかになった。現在、UTF1のGPEIエレメントとの相互作用等について検討を加えている。

在肝癌中特别表达的谷胱甘肽S-转移酶（GST-P）基因的表达受我们鉴定的增强子GPEI的控制。因此，我们开始研究以克隆的转录因子结合与GPEI增强子并促进GST-P基因表达的目标。我们首先决定将酵母的遗传学用于克隆cDNA。换句话说，当将His3基因引入带有HIS3基因突变的酵母中时，该基因用GPEI元素替换了原始增强剂区域，该元素已被发现在酵母中充当抑制剂，该基因的转录水平很低，携带该基因的酵母也显示出他的^ - 景观型。因此，我们进一步认为，如果将cDNA文库引入该酵母中，当表达与GPEI元件的转录因子结合时，酵母将仅表现出他的^+表型。实际上，筛选由F9细胞制备的cDNA文库，胎儿癌细胞产生的酵母菌菌落表现出他的^+表型。从酵母中收集cDNA，并确定碱序列，并发现它是过去没有报道的新克隆。所得的cDNA命名为UTF1，生化分析表明，UTF1无疑促进了HIS3基因的转录。但是，已经揭示了未观察到DNA结合活性。目前，我们正在考虑UTF1与GPEI元素的相互作用。