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遺伝子情報維持に関与するタンパク質カスケードの解明

阐明参与维持遗传信息的蛋白质级联

基本信息

批准号：
06263202
负责人：
内田和彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリADP-リボース合成酵素が、DNA損傷部位に結合してから種々のタンパク質に相互作用し、細胞周期のG1もしくはG2停止を促し、その結果DNA修復がスムーズに行なわれるのではないかという作業仮説のもとに、免疫沈降法とWest-westernblotting法を用いて本酵素と相互作用するタンパク質の同定を試みた。またin vivoでポリADP-リボース合成酵素がどのように機能しているかを、ショウジョウバエで本酵素遺伝子の欠損した変異体の単離を試み、その表現形質を解析した。成果:[方法]1)ショウジョウバエポリADP-リボース合成酵素に対する抗体を作成し免疫沈降に用いた。ロイシンジッパーを含む自己修飾ドメインのGST融合タンパク質をプローブに用いて細胞粗抽出液に対するWest-western blottingとλgt11 cDNAライブラリーのスクリーニングを行なった。2)唾腺染色体を用いたin situハイブリダイゼーション法で本酵素遺伝子の染色体上の位置を同定し、すでに報告されている欠失変異体を解析した。[結果]1)ショウジョウバエKC細胞の粗抽出液を抗ショウジョウバエポリADP-リボース合成酵素抗体にて、123、116、92、77、63kDaのタンパク質が共沈した。同様にWest-western blotting法にて結合するタンパク質を検出した。West-western blotting法によるcDNAライブラリーのスクリーニングにより60万個の中から、19個のクローンを単離した。得られたクローンにコードされるタンパク質は、ポリADP-リボース合成酵素とヘテロダイマーを形成すると考えられた。2)ポリADP-リボース合成酵素は第3染色体にマップされた。同領域に欠失をもつ変異体のうち、2つの変異体が本酵素遺伝子の一部のみを欠失しており、これらのホモ接合体は成虫になることができず、発生のいずれかの段階で死ぬことが明らかになった。

DNA repair is carried out in the presence of ADP-1 synthase, DNA damage site binding, DNA protein interaction, cell cycle G1/G2 arrest, and as a result, DNA repair is carried out in the presence of ADP-1 synthase, DNA damage site binding, DNA protein interaction, cell cycle G1/G2 arrest, and DNA repair. In vivo, ADP-A synthase is used to analyze the function of the enzyme and the quality of its expression. Results:[Methods]1) The immune system was established by using the enzyme. GST-fused proteins containing self-modifying proteins were used to isolate the proteins from the cells in the Western blotting and λgt11 cDNA library. 2)The position of this enzyme gene on the chromosome was determined by the method of chromosome analysis in situ. [Results]1) The crude extract of KC cells was co-precipitated with the 123, 116, 92, 77 and 63kDa proteins of ADP-specific enzyme antibody. The same West-western blotting method is used to combine the two methods. West-western blotting method: 600,000 cDNA fragments, 19 cDNA fragments The first step is to create a new environment. 2) ADP-1 synthase is located on chromosome 3. In the same field, there are two different types of enzyme. One part of the enzyme gene is missing. The other part of the enzyme gene is missing. The other part of the enzyme gene is missing. The adult of the enzyme is missing. The stage of development is dead.