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脳、免疫系における極微少細胞集団中の遺伝子発現頻度解析によるタンパク質機能解明

通过大脑和免疫系统微观细胞群的基因表达频率分析来阐明蛋白质功能

基本信息

批准号：
12202010
负责人：
内田和彦
金额：
--
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12202010/
关键词：
脳遺伝子発現頻度解極微少細胞集団ノックアウトマウス

项目摘要

[目的]脳は機能的、位置的に異なる細胞集団、組織からなる。また免疫系は分化段階において異なる性質をもった細胞群に分けることができる。これらの細胞集団における機能分担を明らかにすることを目的として、極微少細胞集団中の遺伝子発現頻度解析を行い、遺伝子からタンパク質機能の解明に結びつける。[方法]マイクロアレイもしくはマクロアレイによってマウスの脳の各部位を採取し、脳の特定領域での遺伝子発現を解析し、再アレイ化する。マイクロダイセクションによって極微少細胞集団の取り出し、高感度遺伝子発現頻度解析を行う。厳密な定量性が要求されるため、まずプローブの固定化を均一にするとともに、内部コントロールを用いた定量化を試みる。[結果]1.極微量組織を用いた脳特異的遺伝子発現解析クローンの選択マウス脳由来cDNA5000個を用いたマイクロアレイを作製した。解剖学的に特徴のある脳部位、機能的に分類されている領域に着目して細胞を切り出し、遺伝子発現頻度解析を行った。3ヶ月齢のP53のノックアウトマウスを用いた。p53-/- ♂マウスbrain(大脳皮質部)とp53+/+ ♂マウスbrain(大脳皮質部)を切り出し比較した結果、複数のp53の下流で調節を受けている遺伝子を見いだした。その中にGタンパク質にカップルしたオーファン受容体が見つかった。その機能について検討している。2.高感度遺伝子発現頻度解析システムの構築p53遺伝子の一部の配列を複数選択し、これに相当するオリゴヌクレオチドを合成し、固定化した電極を用いて、電気化学的にハイブリド形成を検出し、測定電流応答の差が発現量ともっとも相関する条件を得た。また通常のDNAマイクロアレイ法を用いてmRNA量の微量測定を行うため、DNAを用いたモデル実験を行い、細胞あたり2コピーから10コピーまでの定量性が得られるシステムを開発した。

[Objective] The function and position of cell aggregation and tissue differentiation are different. The immune system is divided into different stages and different properties. The analysis of gene occurrence frequency in small number of cell clusters and the analysis of gene function in small number of cell clusters [Methods] The analysis and re-analysis of the gene expression in specific areas were carried out by taking samples from various parts of the body. Analysis of the frequency of occurrence of highly sensitive genes The quantitative requirements are: [Results] 1. Micro-organism analysis of 5000 cDNA fragments Anatomical characteristics, location, function, classification, field of vision, cell cutting, gene occurrence frequency analysis 3 months ago, P53 was released. p53-/-<$brain (large cortex)<$p53 +/+<$brain (large cortex) In the middle of the game, the quality of the game is very high. The function is to search for information. 2. The analysis of high sensitivity gene expression frequency and the construction of a part of p53 gene expression are based on the following conditions: multiple selection, corresponding selection, synthesis, immobilization, electrode application, electrochemical reaction, detection, and correlation. The usual DNA sequencing method was used to determine mRNA levels in microassays. DNA sequencing was used to determine mRNA levels in microassays.