ショウジョウバエを用いたDNA修復におけるポリADP-リボース合成酵素の機能解析

果蝇 DNA 修复中聚 ADP-核糖合酶的功能分析

• 批准号: 05770072
• 负责人: 内田 和彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770072/
• 关键词: DNA修復; ポリ(ADP-リボシル)化; ショウジョウバエ; アフリカツメガエル

ショウジョウウバエを用いたDNA修復におけるポリ(ADP-リボース)合成酵素の機能解析ポリ(ADP-リボシル)化は、核内のタンパク質にポリ(ADP-リボース)残基を付加する反応で、阻害剤を用いた実験から、細胞の増殖や分化との関連が示唆されているが、未だにその生理的役割は不明である。そこで、タンパク質のADP-リボシル化の生理機能を解析する上で、有用と考えられるアフリカツメガエル、サクラマス、ショウジョウバエから単離した本酵素の_cDNAを用いて、卵割に伴う遺伝子レベルでの変化を解析した。また、ショウジョウバエでは、本酵素遺伝子の欠損した変異体を得ることを試みた。今年度の結果は次の通りである。1)アフリカツメガエルの_cDNAをプローブとして発生のどの時期に発現されるかを検索し、本酵素の遺伝子発現は発生初期に高く、漸減 することがわかった。また、mRNAのin situハイブリダイゼーション法によって、これらのmRNAの局在を調べた結果、表皮、脊索に高い発現が認められたが、その他、特に局在は認められなかった。2)クローン化したショウジョウバエのポリADP-リボース合成酵素遺伝子をプローブとして唾腺多糸染色体上でのポリADP-リボース合成酵素遺伝子の位置を決定した。3)既に単離されている突然変異の中から、ポリADP-リボース合成酵素遺伝子の座位と同じ位置にマップされる突然変異体、5つを同定した。いずれの変異体もホモ接合体で致死であった。サザンプロットハイブリダイゼーション法によりポリADP-リボース合成酵素遺伝子の欠失を解析している。

シ ョ ウ ジ ョ ウ ウ バ エ を with い た DNA repair に お け る ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) synthetic enzyme の function analytical ポ リ (ADP - リ ボ シ ル) change within は, nuclear の タ ン パ ク qualitative に ポ リ (ADP - リ ボ ー ス) residues を plus す る anti 応 で, resistance against tonic を い た be 験 か ら や differentiation, cell の raised colonization と の masato even が in stopping さ れ て Youdaoplaceholder0 るが, non-だ にそ だにそ physiological corvee るが unknown である. そ こ で, タ ン パ ク qualitative の ADP - リ ボ シ ル change の physiology を parsing す る で, useful と exam え ら れ る ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル, サ ク ラ マ ス, シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ か ら 単 from し た this enzyme の _cDNA を with い て and egg cut に う heritage 伝 son レ ベ ル で の variations change を parsing し た. Youdaoplaceholder0, ショウジョウバエで ショウジョウバエで, the residual 伝 of this enzyme, the deficient <s:1> た variant を, る る とを みた test みた. The <s:1> results of this year である times <s:1> all である である である. 1) ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の _cDNA を プ ロ ー ブ と し て 発 raw の ど の period に 発 now さ れ る か を 検 cable し, this enzyme is の posthumous son 伝 発 now は 発 born early high に く, decreasing す る こ と が わ か っ た. ま た, mRNA の in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method に よ っ て, こ れ ら の mRNA の bureau in を adjustable べ た results, epidermis, notochord に high い 発 が now recognize め ら れ た が, そ の he, に bureau at は め ら れ な か っ た. 2) ク ロ ー ン change し た シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ の ポ リ ADP - リ ボ ー ス synthetic enzyme heritage 伝 son を プ ロ ー ブ と し て salivary gland much si on chromosome で の ポ リ ADP - リ ボ ー ス synthetic enzyme heritage 伝 の location を decided し た. 3) both に 単 from さ れ て い る sudden variations in different の か ら, ポ リ ADP - リ ボ ー ス synthetic enzyme heritage 伝 son と の seat position with じ に マ ッ プ さ れ る suddenly - variants, 5 つ を with fixed し た. The ずれ variant であった ホモ junction で lethal であった. サ ザ ン プ ロ ッ ト ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method に よ り ポ リ ADP - リ ボ ー ス synthetic enzyme heritage 伝 の owe son lost を parsing し て い る.

项目成果

Uchida,K.: "Cloning cDNA encoding Drosophila poly(ADP-ribose) polymerase;leucine zipper in the auto-modification domain.21GC03:Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A." 90. 3481-3485 (1993)

Uchida,K.：“克隆编码果蝇聚（ADP-核糖）聚合酶的 cDNA；自动修饰域中的亮氨酸拉链。21GC03：Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.”

Uchida,K.: "Isolation of poly(ADP-ribose) polymerase cDNA from Xenopuslaevis; Phylogenetic conservation of the functional domains." Gene. 137. 293-297 (1993)

Uchida,K.：“从爪蟾中分离聚（ADP-核糖）聚合酶 cDNA；功能域的系统发育保守性。”

Uchida,K.: "Poly(ADP-ridose) Polymerase:Structural Conservation amongDifferent Classes of Animals and its Implications." Mo1.Cell.Bioochem.(in press).

Uchida,K.：“聚（ADP-ridose）聚合酶：不同类动物之间的结构保守及其影响。”