神経細胞コミュニティーに働く液性生存維持因子とその受容体クローニング

克隆体液存活因子及其作用于神经元群落的受体

• 批准号: 06272227
• 负责人: 福嶋 伸之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06272227/
• 关键词: 生存維持因子; 神経細胞死; 培養上清

神経細胞の生存を維持する液性因子を神経細胞の上清中に見い出し、その同定および抗体作成を目的として研究を行った。胎生17日のラット大脳皮質より調製した神経細胞を低密度で蒔き無血清下で一日培養すると、ほとんどの細胞が死滅する。これに対し、高密度(低密度の5倍の密度)で培養した時、細胞の生存が維持された。高密度培養した時の培養上清を低密度培養系に加えても、同様に生存が維持された。これらのことより、培養上清中に液性生存維持因子(細胞死抑制因子)が存在していることが示唆された。上清中に含まれる生存因子の生存維持活性は、酸性下での熱処理や凍結融解により影響を受けなかったが、熱処理やProteinaseK処理により約60%減少した。このことから、生存維持因子の少なくとも一部は蛋白性であることが分かった。低密度培養系においてNGF、aFGF、bFGF、EGF、LamininあるいはFibronectinのような既存の生存維持因子は無効であった。さらに培養上清中の生存維持活性は、ゲルろ過クロマトグラフィーおよびSDS-PAGEにおいてそれぞれ分子量45kDaおよび20と22kDaのところに認められた。以上のことから、今回見い出された生存維持因子は、既知のものとは異なる新規物質の可能性が考えられる。これらの因子の大量精製を行い、現在一次構造を解析中である。さらに、これらのモノクロナール抗体の作成を進めている。特に中和抗体は、本因子の神経細胞コミュニティーにおける役割を調べる上で重要な鍵となると期待される。

The aim of this study is to investigate the presence of cytokines in the supernatant of neurons, their homeostasis and antibody production. At the 17th day of birth, the large cortex was modulated and the neurons were cultured at low density and without serum for one day. In contrast, cell survival was maintained when cultured at high density (5 times higher density than low density). The culture supernatant of high-density culture system was added to the culture supernatant of low-density culture system, and the survival of the culture supernatant was maintained. In the culture supernatant, there is a liquid survival maintenance factor (cell death inhibitory factor). The survival maintenance activity of the supernatant containing the survival factor was reduced by about 60% under the influence of heat treatment and freezing and thawing under acidic conditions. The survival maintenance factor is less than one part of protein. Low density culture system contains NGF, aFGF, bFGF, EGF, Laminin, and Fibronectin. The survival maintenance activity in the culture supernatant was determined by SDS-PAGE. The molecular weight was 45kDa, 20 kDa and 22kDa. The survival maintenance factor of the above mentioned substances is different from that of the existing substances. A large number of factors are refined, and now a structural analysis is carried out. In the meantime, the production of anti-tumor drugs is progressing. Specifically, neutralizing antibodies are expected to be an important key in regulating the function of this factor in neurons.