ヒト末梢血CD34+細胞の無血清培養による増幅とその臨床応用

无血清培养扩增人外周血CD34+细胞及其临床应用

• 批准号: 06277201
• 负责人: 澤田 賢一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06277201/
• 关键词: 造血幹細胞; CD34; 末梢血; in vitro増幅; in vivo増幅; 幹細胞移植; 無血清培地

末梢血幹細胞移植(PBSCT)は、造血器悪性腫瘍のみならず、化学療法に感受性を有する固形癌に対しても根治を目的とした超大量化学療法の施行を可能とする有力な方法である。自家PBSCTや同種PBSCTにおいてCD34+細胞の純化は極めて重要な意義を有する。前者では末梢血に混在する腫瘍細胞の除去、後者ではGVHD抑制のためのT細胞除去であり、両者に共通する意義としてin vitro増幅にはCD34+細胞の純化がほぼ必須である。基礎研究および臨床応用を目的としたCD34+細胞のlarge scaleでの純化には既存のいくつかの方法があるが高価で煩雑であり、また、純化効率についても満足すべきものでなく実用的とは考えがたい。この観点から我々は、CD34+細胞の研究の進展と臨床応用を目的として既存の方法にこだわらないCD34+細胞純化法の開発を検討するとともにCD34+細胞のin vitro増幅における基礎検討を行なってきた。本年度の研究により以下の点が明かとなった。1)ヒト末梢血CD34+細胞のin vitro増幅に及ぼす造血因子(G-CSF、GM-CSF、IL-3、IL-6、SCF)の効果を検討し、各造血因子の増幅における意義、各分化段階の幹細胞の増幅率を明らかにした。2)in vitro増幅においてある種の造血抑制因子(IFN-α)がapoptosisを介して抑制的に働くことを明らかにした。3)同種PBSCTを念頭において、G-CSFのin vivo投与による末梢血幹細胞採取の効率化の条件設定を明らかにした。また、下記の点について進展がみられている。4)ナイロンウ-ルを用いた付着細胞除去の効率化・迅速化(平成7年の日血総会で発表予定)をもとにしたCD34+細胞純化のlarge scale化と経費削減。5)4)によりlarge scaleによるCD34+細胞純化効率:純化率98.4〜98.8%、回収率43.6〜43.8%、所要時間約4時間、経費約10万円でありさらに改善中である。

Peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT) is a powerful method for treating hematopoietic tumors, chemotherapy, and solid cancer. The purification of CD34 + cells in PBSCT and allogeneic PBSCT is of great significance. The former is the removal of tumor cells mixed in peripheral blood, the latter is the removal of T cells from GVHD inhibition, and the latter is the common significance of CD34 + cells purification in vitro. The purification of CD34 + cells on a large scale for basic research and clinical purposes is based on existing methods that are highly effective in purification and efficiency. This review focuses on the development of CD34 + cell purification methods, and on the fundamental study of CD34 + cell proliferation in vitro. This year's research is focused on the following points: 1) The effect of CD34 + cells in vitro and hematopoietic factors (G-CSF, GM-CSF, IL-3, IL-6, SCF) on the growth of CD34 + cells in peripheral blood, the significance of the growth of hematopoietic factors, and the growth rate of stem cells in various differentiation stages are clearly discussed. 2)In vitro, the expression of IFN-α was detected in the medium of apoptosis. 3)PBSCT in vivo, G-CSF in vivo and peripheral blood stem cell collection efficiency conditions are set in the future. The next step is to make progress. 4) The efficiency and rapidity of cell removal (scheduled by the Japanese Blood Conference in Heisei 7) are also required to reduce the large-scale cost of CD34 + cell purification. 5)4) Purification efficiency of CD34 + cells on a large scale: Purification efficiency 98.4 ~ 98.8%, recovery rate 43.6 ~ 43.8%, time required about 4 hours, cost about 100,000 yen.