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抗腫瘍性マクロファージの腫瘍認識機構。C-タイプレクチンの関与

抗肿瘤巨噬细胞的肿瘤识别机制。

基本信息

批准号：
06282213
负责人：
今井康之
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06282213/
关键词：
マクロファージ Tn抗原 MMGL レクチン O-結合型糖鎖 benzyl-GalNAc

项目摘要

癌細胞において糖鎖の生合成異常はしばしば見られる現象である。O-結合型糖鎖の伸張不全によるTn抗原の発現もその一つで診断上の価値が認められているが、免疫担当細胞を含む宿主細胞との相互作用において、癌細胞上のTn抗原がどんな意味を持つのかは不明であった。マウスマストサイトーマP815細胞をbenzyl-GalNAc存在下培養し、O-結合型糖鎖の伸張を阻害しTn抗原の発現を増加させると、糖鎖認識分子であるマクロファージレクチン(MMGL)を介してマクロファージに対するaccessibilityが高まることがわかった。しかし、ln vitroでのマクロファージによる細胞障害性試験では、必ずしもbenzyl-GalNAc処理P815細胞が高い感受性を示さなかった。その原因として、アッセイ時にO-結合型糖鎖の伸張が生合成により回復し、benzyl-GalNAc処理の効果が持続しないためと考えられた。そこで、ビオチン化した組み替え型MMGL(rML)を用いて細胞をセルソーターで繰り返し分離し、Tn抗原の発現量がより安定な細胞株の樹立を試みた。すなわち、マウス卵巣癌OV2944-HM-1細胞を用いて、rMLに対する結合部位の多い亜株と少ない亜株の樹立に成功した。また、亜株間で、固相化したrMLへの細胞接着に差があることを確認した。今後、これらの細胞の間で、マクロファージに対する感受性やin vivoにおける転移能に違いがあるかどうかを調べる予定である。ところで、OV2944-HM-1細胞の肺転移結節においては、MMGLを発現したマクロファージが多数浸潤していることを我々の作製したモノクローナル抗体を用いて免疫組織学的に明らかにした。一方、MMGLのcDNAをマウスT細胞株CTLL-2にトランスフェクトした細胞CTLL-MLを作製し、MMGLの発現をフローサイトメトリーおよびイムノブロットにより確認した。OV2944-HM-1細胞の肺転移結節を有するマウスにCTL-MLを蛍光標識後投与すると、ベクターのみのトランスフェクタントに比べて、転移結節内への移行性が高いことが判明し、マクロファージの腫瘍内浸潤にMMGLが関与している可能性が示された。

Cancer cells are abnormal in the biosynthesis of glycogen. O-linked glycopolock incomplete stretch of Tn antigen production, diagnostic value, immune-bearing cells, host cell interaction, Tn antigen on cancer cells, significance, persistence, uncertainty. P815 cells were cultured in the presence of benzyl-GalNAc, and the expression of Tn antigen was inhibited by O-binding glycogen chain. Glycogen chain recognition molecule (MMGL) was mediated by high accessibility. P815 cells treated with benzyl-GalNAc showed high sensitivity to cell toxicity. The reason for this is that O-linked glycan chains are produced in the presence of natural and benzyl-GalNAc. In order to establish stable cell lines, the production of Tn antigen and the isolation of Tn antigen were tested. Many strains of OV2944-HM-1 cells were successfully established by using rML and binding sites. The difference between plants, solid phase and cells was confirmed. In the future, the sensitivity of these cells will be regulated in vivo. The expression of MMGL in the lung metastasis nodes of OV2944-HM-1 cells was detected by immunohistochemistry. The expression of MMGL cDNA in CTLL-2 cells was confirmed by PCR. OV2944-HM-1 cells showed higher mobility in the metastatic nodules than in the metastatic nodules, and the possibility of MMGL involvement in tumor infiltration was demonstrated.