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GTP結合蛋白質の翻訳後修飾による機能発現制御メカニズムに関する研究

GTP结合蛋白翻译后修饰调控功能表达的机制研究

基本信息

批准号：
07256213
负责人：
藤山秋佐夫
金额：
$ 0.96万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、GTP結合タンパク質の機能発現・機能制御に重要な役割を果たしている翻訳後修飾の、機能発現・機能制御への関わりを明かにすることを目的する。これまでの研究で、我々は分裂酵母ras1蛋白質の生化学的特性を明らかにするとともに、低分子量GTP結合蛋白質を中心に翻訳後修飾構造を持つ蛋白質のデータベース化を行ってきた。また、昨年度に引き続き、本年度も分裂酵母のras1蛋白質を基質とするファルネシル転移酵素の生化学的解析に焦点を絞って研究を行い、以下の知見を明らかにした。まず、分裂酵母粗抽出液を部分分画し、配列の異なるオリゴペプチドを基質に用いてファルネシル基転移酵素、ゲラニルゲラニル基転移酵素の分布を調べたところ、両酵素の活性は分離でき、なおかつ複数のファルネシル基転移酵素の存在を示唆する結果を得た。次に、分裂酵母ras1蛋白質由来のオリゴペプチドを基質に用いて、これに対応する転移酵素活性を部分精製した。その結果、この酵素は未知のタンパク質と複合体を形成し、それが安定化に寄与していること、既知の酵素素の約1.5倍の分子量を有することが明らかになった。この精製過程で、基質特異性の異なる二つの活性画分に分離できたので、その各々について速度論的解析を行った。その結果、他生物種のファルネシル転移酵素と異なり、分裂酵母の酵素は、本来ゲラニルゲラニル基転移酵素Iの認識配列とされているCAAL配列を、本来のファルネシル化シグナルと区別することなく基質として認識しファルネシル化すること、ゲラニルゲラニル活性は持たないことを証明した。この知見は、従来のファルネシル化とゲラニルゲラニル化の認識配列に関する認識を新たにするものであり、特異性決定領域につい再検討を要することを明らかにした。

The purpose of this study is to clarify the relationship between functional development and functional control of GTP binding protein and its important function. In this study, we investigated the biochemical properties of the split yeast ras1 protein and the structure of the low molecular weight GTP binding protein. This year, the focus of the study on the biochemical analysis of ras1 protein matrix of split yeast was carried out. The following findings were made clear. The results were obtained by partial fractionation of crude yeast extract, by the use of different substrates, by the modulation of the distribution of enzyme, by the activity of enzyme, by the separation of enzyme, by the presence of enzyme. In addition, yeast ras-1 protein origin, substrate use, and enzyme activity were partially refined. As a result, the enzyme has a molecular weight of about 1.5 times that of the known enzyme. The purification process, the substrate specificity, the activity analysis, the separation, the velocity analysis, The results of this study demonstrate that there is a need to recognize and align the CAAL sequence of enzyme I in yeast and other biological species, and that there is a need to recognize and differentiate the CAAL sequence of enzyme I in yeast and other biological species. This knowledge is based on the knowledge of the future, and the knowledge of the future.