筋および細胞骨格蛋白質の発生と心筋細胞の分化ならびにその異常

肌肉和细胞骨架蛋白的发育以及心肌细胞的分化及其异常

• 批准号: 07266204
• 负责人: 嶋田 裕
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07266204/
• 关键词: 心筋; 骨格筋; トロポニン; アイソフォーム; 筋原線維形成; タグ標識; リポフェクション

筋細胞の分化の過程で一時的に出現するisoformの存在意義については、まだほとんど解明されていない。当研究では、培養心筋と骨格筋細胞に、本来各筋細胞に発現されないTnIのisoformおよびキメラTnIを強制発現させた場合、それらは筋原線維に取り込まれるか否かを調べることにより、isoformの出現とその各部分の役割を解析した。心筋型TnI(CTnI)および骨格筋型TnI(STnI)にタグ(c-myc)標識したcDNAを発現ベクターpBK-CMVに組み込み、培養ニワトリ胚心筋あるいは骨格筋細胞にリポフェクション法により導入した。一定時間後、培養細胞をc-myc抗体とrhodamine-phalloidinにより二重染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡で観察した。CTnIとSTnIは、それぞれ同種の筋原線維(筋原線維のうちのアクチンフィラメントの存在する長さの部位)に取り込まれたので、TnIの取り込みはタグにより阻害されないと考えられた。胚心筋に、本来発現されているSTnI遺伝子を導入した場合には、筋原線維に取り込まれた。しかし胚骨格筋に、本来発現されていないCTnI遺伝子を導入した場合には、横紋構造の染色は弱いので、本来発現していないisoformを強制発現させても筋原線維には取り込まれにくいことがわかった。しかしCTnIの頭部および尾部をSTnIに変化させたキメラTnIは骨格筋の筋原線維によく取り込まれた。すなわち、TnI分子の一部が取り込みを抑制していることが示唆された。タグ標識を用いたこの方法は筋蛋白質の機能や筋原線維の形成機構の解析に有効と思われた。

The differentiation process of tendon cells is a temporary occurrence and the meaning of existence of isoform is. When studying and cultivating heart muscle and bone lattice cells, the original cells of each muscle are different and the isoform of TnI is forced to appear.せたoccasion, それらはsujihara line dimension にGET り込まれるか不かを动べることにより, isoform のappear とそのeach part のservice cut をanalytic した. Cardiac type TnI (CTnI) およびbone lattice type TnI (STnI) にタグ (c-myc) logo したcDNA を発appear ベクターpBK-CMV groupみ込み, cultured ニワトリembryonic heart muscle あるいはbone lattice cells にリポフェクション method and introduced した. After a certain period of time, the cells were cultured, double stained with c-myc antibody and rhodamine-phalloidin, and examined with a confocal microscope. CTnIとSTnIは、それぞれ Same kind of sijihara line dimension (sujihara line dimension のうちのアクチンフィラメントのする长さの区)にGETり込まれたので、TnIのGETり込みはタグにより hinder されないと卡えられた. Embryonic heart muscle に, original 発 appear されているSTnI 伝子を introduction した occasion には, jihara line dimension にtake り込まれた.しかしEmbryonic latticeworkに、Original appearanceされていないCTnI legacy 伝子をIntroductionしたoccasionには、The horizontal stripe structureのdyingは weakいので, the original 発appears していないisoformをforced 発appears させてもsujihara line dimension には take り込まれにくいことがわかった.しかしCTnIのheadおよびtailをSTnIに変化させたキメラTnIは Bone grid tendonのsujihara line dimensionによくtake り込まれた.すなわち, TnI molecule part of the がtake り込みを inhibit していることがshows instigation された. The タグ mark is made using the いたこの method, and the function of the gluten protein and the formation mechanism of the original linear dimension of the gluten are effectively analyzed and considered.

项目成果

Masatoshi Komiyama: "Troponin and dystrophin in regenerating muscle fibers with and without denervation." Muscle & Nerve. 17. 1062-1064 (1994)

Masatoshi Komiyama：“肌钙蛋白和肌营养不良蛋白在去神经和不去神经的情况下再生肌纤维中的作用。”

Katsunori.Kouchi: "Incorporation of microinjected biotin-labelled actin into nascent myofibrils of cardiac myocytes:an immunoelectron microscopic study." Journal of Muscle Research and Cell Motility. 14. 292-301 (1993)

Katsunori.Kouchi：“将显微注射的生物素标记的肌动蛋白掺入心肌细胞的新生肌原纤维中：一项免疫电子显微镜研究。”

Naoji Toyota: "Expression of troponin C genes during development in the chicken." International Journal of Developmental Biology. 37. 531-537 (1993)

Naoji Toyota：“肌钙蛋白 C 基因在鸡发育过程中的表达。”

Naoji Toyota: "Developmental Cardiology. Inborn Heart Diseases:Developmental Mechanisms" Futura,N.Y., 679(71-77) (1995)

Naoji Toyota：“发育心脏病学。先天性心脏病：发育机制” Futura，N.Y.，679（71-77）（1995）

Fujio Atsuta: "Distribution of connectin(titin),nebulin and α-actinin at myotendinous junctions of chicken pectoralis muscles: an immunofluorescence and immunoelectron microscopic study." Journal of Muscle Research and Cell Motility. 14. 511-517 (1993)

Fujio Atsuta：“连接蛋白（肌联蛋白）、星云蛋白和 α-肌动蛋白在鸡胸肌肌腱连接处的分布：免疫荧光和免疫电子显微镜研究。”肌肉研究和细胞运动杂志 14. 511-517 (1993)。