筋および細胞骨格蛋白質の発生と心筋細胞の分化ならびにその異常

肌肉和细胞骨架蛋白的发育以及心肌细胞的分化及其异常

• 批准号: 06274206
• 负责人: 嶋田 裕
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06274206/
• 关键词: 胚心筋細胞; マイクロインジェクション; 免疫電顕; アクチン; ミオシン; 筋原線維形成; トロポニン

1.筋原線維形成過程におけるアクチンおよびミオシンの動態:ニワトリ胚心室筋由来の培養細胞に、ビオチン標識アクチンまたはミオシン軽鎖をmicroinjectionし、1分〜1時間後に抗ビオチン抗体および5nmコロイド金標識二次抗体で処理し(ある場合には銀増感も行った)、超薄切片を電子顕微鏡で観察した。アクチンを導入すると、筋原線維の近位部(末端以外の部分)ではそのA帯レベルの周辺が標識され、またミオシンを導入すると、I帯レベル(特にA-I接合部付近)が標識された。このことは、アクチンとミオシンの重合は、相互の蛋白質の存在下に起こることが考えられ、この機構で筋原線維の直径が増加することが考えられた。また筋原線維の遠位部(末端)では、終末筋節の終末アクチンフィラメントの存在する部位に両蛋白質の取り込みがみえ、この部において活発なフィラメント形成と代謝回転の起こっていることが考えられた。さらに、筋原線維の延長線上にも膜と密接な関係をもってアクチン分子が集合しているのがみえ、これは筋原線維の延長と、初期のアクチンフィラメント束の形成に関係していることが考えられた。2.心筋型トロポニンI(CTnI)cDNAの幼若骨格筋細胞への導入による筋原線維形成機構の解析:胚骨格筋細胞ではCTnIの発現はみられない。そこで培養幼若骨格筋細胞およびC2C12細胞にCTnIのcDNA(ほぼ全長)を導入(lipofection法)してCTnIを強制発現させることにより、筋原線維形成機構を解析した。導入した細胞をCTnI抗体で免疫蛍光染色すると、横紋のない線維束は反応したが、明らかな横紋のある筋原線維は反応しなかった。すなわち成熟筋原線維には、そこに本来(発生期にも、成熟しても)存在しないCTnIの取り込みを阻止または取り込まれたものを排除するような機構が存在すると考えられた。

1. The dynamics of tendon scar formation process: microinjection of cultured cells from embryonic ventricular tendon origin, identification of microinjection, treatment with anti-tendon antibody and 5nm gold identification secondary antibody after 1 min ~ 1 time (in case of silver sensitization), ultra-thin section observation by electron microscope. The proximal part of the tendon trace dimension (except for the end) is introduced into the A band and the peripheral part is introduced into the A band and the I band is introduced into the A band (especially near the A-I junction). In the presence of protein, the diameter of the tendon trace increases. The distal part (terminal) of the tendon origin mark is located at the end of the terminal tendon. The protein is extracted from the distal part of the tendon. The metabolic cycle is initiated. The relationship between the film and the tight joint on the wiring board of the tendon trace is not only the relationship between the molecule and the bundle, but also the relationship between the extension of the tendon trace dimension and the bundle of the tendon trace dimension. 2. Analysis of the Mechanism of Tendon Trauma Formation in Embryonic Tendon Cells during the Introduction of CTnI cDNA into Embryonic Tendon Cells CTnI cDNA(full length) was introduced into cultured juvenile skeletal muscle cells and C2C12 cells (lipofection method), and the mechanism of CTnI gene formation was analyzed. The introduction of CTnI antibodies into the cells resulted in the staining of the cells. The origin of the mature tendon is the origin of the mature tendon.

项目成果

Masatoshi Komiyama: "Troponin and dystrophin in regenerating muscle fibers with and without denervation." Muscle & Nerve. 17. 1062-1064 (1994)

Masatoshi Komiyama：“肌钙蛋白和肌营养不良蛋白在去神经和不去神经的情况下再生肌纤维中的作用。”

Katsunori.Kouchi: "Incorporation of microinjected biotin-labelled actin into nascent myofibrils of cardiac myocytes:an immunoelectron microscopic study." Journal of Muscle Research and Cell Motility. 14. 292-301 (1993)

Katsunori.Kouchi：“将显微注射的生物素标记的肌动蛋白掺入心肌细胞的新生肌原纤维中：一项免疫电子显微镜研究。”

Naoji Toyota: "Expression of troponin C genes during development in the chicken." International Journal of Developmental Biology. 37. 531-537 (1993)

Naoji Toyota：“肌钙蛋白 C 基因在鸡发育过程中的表达。”

Masatoshi Komiyama: "Dynamics of actin and assembly of connectin(titin)during myofibrillogenesis inembryonic chick cardiac muscle cells in vitro." DevelopmentalDynamics. 196. 291-299 (1993)

Masatoshi Komiyama：“体外胚胎鸡心肌细胞中肌原纤维形成过程中肌动蛋白和连接蛋白（肌联蛋白）组装的动力学。”

Fujio Atsuta: "Distribution of connectin(titin),nebulin and α-actinin at myotendinous junctions of chicken pectoralis muscles: an immunofluorescence and immunoelectron microscopic study." Journal of Muscle Research and Cell Motility. 14. 511-517 (1993)

Fujio Atsuta：“连接蛋白（肌联蛋白）、星云蛋白和 α-肌动蛋白在鸡胸肌肌腱连接处的分布：免疫荧光和免疫电子显微镜研究。”肌肉研究和细胞运动杂志 14. 511-517 (1993)。