筋および細胞骨格蛋白質の発生と心筋細胞の分化ならびにその異常

肌肉和细胞骨架蛋白的发育以及心肌细胞的分化及其异常

基本信息

批准号：
06274206
负责人：
嶋田裕
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.筋原線維形成過程におけるアクチンおよびミオシンの動態:ニワトリ胚心室筋由来の培養細胞に、ビオチン標識アクチンまたはミオシン軽鎖をmicroinjectionし、1分〜1時間後に抗ビオチン抗体および5nmコロイド金標識二次抗体で処理し(ある場合には銀増感も行った)、超薄切片を電子顕微鏡で観察した。アクチンを導入すると、筋原線維の近位部(末端以外の部分)ではそのA帯レベルの周辺が標識され、またミオシンを導入すると、I帯レベル(特にA-I接合部付近)が標識された。このことは、アクチンとミオシンの重合は、相互の蛋白質の存在下に起こることが考えられ、この機構で筋原線維の直径が増加することが考えられた。また筋原線維の遠位部(末端)では、終末筋節の終末アクチンフィラメントの存在する部位に両蛋白質の取り込みがみえ、この部において活発なフィラメント形成と代謝回転の起こっていることが考えられた。さらに、筋原線維の延長線上にも膜と密接な関係をもってアクチン分子が集合しているのがみえ、これは筋原線維の延長と、初期のアクチンフィラメント束の形成に関係していることが考えられた。2.心筋型トロポニンI(CTnI)cDNAの幼若骨格筋細胞への導入による筋原線維形成機構の解析:胚骨格筋細胞ではCTnIの発現はみられない。そこで培養幼若骨格筋細胞およびC2C12細胞にCTnIのcDNA(ほぼ全長)を導入(lipofection法)してCTnIを強制発現させることにより、筋原線維形成機構を解析した。導入した細胞をCTnI抗体で免疫蛍光染色すると、横紋のない線維束は反応したが、明らかな横紋のある筋原線維は反応しなかった。すなわち成熟筋原線維には、そこに本来(発生期にも、成熟しても)存在しないCTnIの取り込みを阻止または取り込まれたものを排除するような機構が存在すると考えられた。

1。在肌原纤维形成过程中肌动蛋白和肌球蛋白的动力学：用生物素标记的肌动蛋白或肌球蛋白轻链对鸡肉胚胎心室肌肉得出的培养细胞进行了微粒，并在1分钟至1小时后用抗生物素抗体和5 NM胶体胶体抗体（在某些二剂中）进行处理（在某些抗生素抗体中，并在某些情况下进行了效果，并在某些情况下进行了效率（在某些二中性抗体中），并在某些抗体中（在某些抗体中），并在某些抗体中（在某些抗体中），并在某些中效应了一例，并在某些抗体中进行了效果，并在某些抗体中进行了效果，并在某些抗体中进行了效果，并在某些二中性抗体中进行了效果。电子显微镜。当引入肌动蛋白时，将肌纤维的近端部分（除终端以外的部分）标记在A波段水平的周围，并且当引入肌球蛋白时，标记了I波段级别（尤其是在A-I交界处）。人们认为这是肌动蛋白和肌球蛋白聚合在存在的存在下发生的，而这种机制会增加肌纤维的直径。此外，在肌原纤维的远端部分（末端），两种蛋白都在末端肌蛋白末端丝蛋白丝存在的位点发现，并且人们认为这部分中存在活性细丝形成和周转。此外，可以看到肌动蛋白分子还聚集在肌原纤维的延伸线上，与膜密切相关，这被认为与肌原纤维的延伸和早期肌动蛋白细丝捆在一起有关。 2。通过将心肌肌钙蛋白I（CTNI）cDNA引入幼年骨骼肌细胞中：在胚胎骨骼肌细胞中未观察到CTNI表达，从而分析了肌原纤维形成的机理。因此，通过将CTNI（几乎全长）（几乎全长）引入培养的幼年骨骼肌细胞和C2C12细胞（LiPofection方法）以强行表达CTNI的cTNI（几乎全长），从而分析了肌原纤维形成的机制。当转染的细胞用CTNI抗体染色时，横纹纤维束反应，但是横纹肌原纤维没有反应。换句话说，人们认为成熟的肌原纤维存在以防止或消除最初不存在的CTNI的掺入（呈新生或成熟）。