腫瘍の放射線・温熱感受性とアポトーシスの関連および関連遺伝子発現との相関

肿瘤放射/热敏感性与细胞凋亡的关系及相关基因表达的相关性

• 批准号: 07274266
• 负责人: 田中 敬正
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07274266/
• 关键词: 放射線治療; 抗腫瘍効果; p53遺伝子; アポトーシス

放射線治療または温熱療法を目的に、当科を受診する患者(肺癌、頭頸部腫瘍、骨盤部腫瘍、悪性リンパ腫)を対象とし、初診時にBiopsyを行い癌遺伝子研究に用いる。また、約10Gy照射時点でBiopsyを行い、アポトーシス(Ap)の観察を行った。癌遺伝子、とくにP53遺伝子が腫瘍縮小効果、予後に関係があるかを調べた。上記の検体を無菌のエッペンチューブに入れて80℃に保存し、適宜下記の実験に供する。保存した検体からDNAをまず抽出し、RT-PCR法によってDNAを増幅し、AGPC法によってmRNAを調整する。Moloney murine virusのreverse transcriptaseを用いてmRNAからfirst strand cDNAを合成し、Gubler-Hoffman法でsecond strandを合成し、cDNAをクローン化する。制限酵素処理したcDNAをアガロース電気泳動で分離し変性する。ゲルからフィルターにトランスファーし、アイソトープラベルしたDNAとハイブリダイゼーションすることにより、p53のプローブに相補的な配列をもったバンドを検出する。検出されたDNAにUV照射を行い定量化する。各遺伝子の発現の有無、およい定量化された個々の検体の特に癌遺伝子と放射線による治療効果、予後との相関関係について検討した。Apの出現の検索;治療患者で10Gy照射した時点でBiopsyを行い、Apの出現を調べる。すなわち、Oncor社より発売されているApop Tag kitを用いて染色した。1000ケの癌細胞の中で出現しているApの出現度を調べた。結果:臨床検体6例でのp53遺伝子の発現と治療効果は病理組織学的に癌細胞が認められなかった検体2例ともp53mRNAの発現が見られた。癌細胞の残存を認めた3例のうち、2例ではp53mRNAの発現が見られなかった。1例では微量のp53mRNAの発現を認めた。発現を認めたp53RNAの塩基配列はWild TypeのP53遺伝子であった。

Purpose of radiotherapy ま た は thermotherapy を に, when families を diagnosis す る patients (lung cancer, head and neck is swollen sores, pelvis swollen sores, 悪 リ ン パ swollen) を like と seaborne し, begin with に Biopsy を line but に 伝 child study with い い carcinoma る. Youdaoplaceholder0, at the irradiation time point of approximately 10Gy, でBiopsyを line った, アポト また シス(Ap) <s:1> 観 examination を line った. Cancer residues 伝, とくにP53 residues 伝 が the effect of tumor reduction and the subsequent に is related to がある がある を を べた べた べた べた べた べた. Written の 検 body を sterile の エ ッ ペ ン チ ュ ー ブ に into れ て 80 ℃ に の preservation し, under appropriate remember be 験 に for す る. Save し た 検 body か ら DNA を ま ず spare し, rt-pcr method に よ っ て DNA を raised し picture, AGPC に よ っ て mRNA を adjustment す る. Moloney murine virus reverse transcriptaseを was synthesized using を てmRNA を らfirst strand cDNAを て, Gubler-Hoffman method でsecond strandを synthesizes を, cDNAを ロ ロ ロ is esterified する. Limit enzyme processing of たcDNAをアガロ ス ス electrokinetic で to separate the mutants する. ゲ ル か ら フ ィ ル タ ー に ト ラ ン ス フ ァ ー し, ア イ ソ ト ー プ ラ ベ ル し た DNA と ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン す る こ と に よ り, p53 の プ ロ ー ブ に phase of な match column を も っ た バ ン ド を 検 out す る. Youdaoplaceholder0 output されたDNAにUV irradiation を perform 検 quantification する. The heritage 伝 son の 発 の now, お よ い quantitative さ れ た a 々 の 検 body の に carcinoma especially heritage 伝 son と radiation に よ る unseen fruit, to the after treatment と の phase masato masato is に つ い て beg し 検 た. The Ap card shows the 検 cable; When the patient was irradiated with で10Gy at the た time point, でBiopsyを performed and を adjustment べる was observed in <s:1> and Ap patches. Youdaoplaceholder0, Oncor agency よ すなわち release 売されて る るApop Tag kitを use て て to stain た た. In 1000ケ <s:1> cancer cells <e:1>, で appears て る るAp appears with a を tone べた. Result: 6 cases clinical 検 body で の p53 heritage 伝 son の 発 now と に cancer cells for the treatment of unseen fruit は pathological histology が recognize め ら れ な か っ た 検 body 2 cases と も p53mRNA の 発 が now see ら れ た. Residual cancer cells を identified めた in 3 cases <s:1> うち and in 2 cases で <s:1> p53mRNA cases が found られな られな った. A trace amount of で p53mRNA sample was found to be を and めた. It is found that を recognizes the めたp53RNA with the <s:1> base coordination of the めた Wild Type <s:1> P53 remains 伝 であった.