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キャピラリーアレイ電気泳動によるがんの高性能遺伝子診断システムの開発

利用毛细管阵列电泳开发高性能癌症基因诊断系统

基本信息

批准号：
07274267
负责人：
馬場嘉信
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kobe Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究においては、既に開発した新規DNA解析法であるCE-LIFシステムとF-SSCPを有機的に結合した高性能遺伝子診断システムを開発し、がん遺伝子およびがん抑制遺伝子に存在する変異および多型を高い感度で検出できることを実証した。また、キャピラリーアレイ電気泳動(CAE)開発に必要な新規ゲルの開発を行った。1.蛍光ラベル化したがん遺伝子あるいはがん抑制遺伝子のワイルドタイプおよび変異型をPCRにより増幅し、CE-LIFシステムを用いて、F-SSCP法により解析した。その際の条件検討を行った。2.がん遺伝子あるいはがん抑制遺伝子の変異および多型を検出するための最適条件を検討した結果、解析に要する時間は、100塩基程度のDNAで30分、300塩基程度のDNAでは60分であった。以上の検討によりCE-LIFとF-SSCPを結合し、CE-LIFの迅速さ、高感度さとF-SSCPの簡便さを兼ね添えたがんの高性能遺伝子診断システムを開発した。3.キャピラリーアレイ電気泳動(CAE)を開発するために、新たに、熱可逆性ゲルである数種の新規ゲルを開発した。このゲルは、室温ではSSCP解析を行い、ゲルの温度を上昇させるとキャピラリーから押し出し新たなゲルと交換できる。従って、この新規ゲルを用いれば、ゲル充填キャピラリーを大量に調整することなく、測定毎にゲルを交換するだけで、高精度なSSCP解析を行うことができる。これらの成果は、がんの遺伝子診断を高速化・高精度化する上で重要な貢献をなすものである。以上の研究成果を基礎に、さらに、システムを発展させて、多数のがん遺伝子・がん抑制遺伝子を同時に解析できるCAEシステムを開発し、F-SSCPと組み合わせ多数の遺伝子の多型を同時に検出できるがんの超高速遺伝子診断システムを確立するための検討を行う。

In this study, new DNA analysis methods were developed, such as CE-LIF and F-SSCP, and organic combination of high-performance gene diagnosis methods was developed, such as CE-LIF and F-SSCP. New regulations are necessary for the development of electromobility (CAE). 1. PCR amplification, CE-LIF analysis, F-SSCP analysis, PCR amplification, CE-LIF analysis, F-SSCP analysis, PCR amplification, CE-LIF analysis, F-SSCP analysis. The conditions of the contract are discussed. 2. The optimal conditions for the detection of DNA diversity and polymorphism were discussed. The analysis time was 30 minutes for DNA at 100 bp and 60 minutes for DNA at 300 bp. CE-LIF and F-SSCP are integrated into each other, CE-LIF is rapid, F-SSCP is highly sensitive, and F-SSCP is simple. 3. The development of several new regulations on electromobility (CAE) The temperature of the SSCP is increased, and the temperature of the SSCP is increased. The new rules are used to determine the number of changes in SSCP resolution, such as the number of changes in SSCP resolution. The results of this study are important for speeding up and improving the accuracy of genetic diagnosis. The above research results are based on the development of CAE system, the simultaneous analysis of most of the genes, the simultaneous detection of multiple types of most of the genes, the establishment of ultra-high speed gene diagnosis system, and the development of F-SSCP system.