ゼブラフィッシュを用いた特異的シナプス形成機構の解析

利用斑马鱼分析特定突触形成机制

基本信息

批准号：
07278246
负责人：
東島眞一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

われわれは脊椎動物で最も単純な中枢神経系をもつ魚類(ゼブラフィッシュ)を用いて、神経回路網の構築過程において関与する新たな分子の同定、そしてその機能解析をめざしている。能瀬(基生研)らはショウジョウバエにおいて、少数の筋肉繊維で発現し、脊椎動物のF-Spondinと高い相同性をもつ遺伝子AN34を発見した。F-Spondinは、Floor plateで特異的に発現する分泌タンパク質で、in vitroにおいて神経繊維伸長を促進することが示されている。我々は、今回相同性が見い出された領域が、神経繊維誘導に基本的な役割を果たすためのドメインと期待し、ゼブラフィッシュから、このファミリーに属する遺伝子断片の単離を試みた。その結果、複数のクローン(約100bpの断片)を単離することができた。本年度計画では、これら遺伝子群の構造解析、発現様式の解析、そして予備計な異所発現実験を行った。(1)構造解析:このファミリーに属する4つの遺伝子予想遺伝子産物の全構造を決定した。うち2種はゼブラフィッシュのF-Spondinとみられる分子であり、ラットのF-Spondinとほぼ同様の構造を示す(F-Spondin1,F-Spondin2とする)。他の2つは互いに良く似ており、配列的にも、また、全構造的にもAN34により関連した分子であった(AN1,AN2とする)。(2)発現様式:4遺伝子すべてが、基本的にはfloor plateで発現していた。(3)異所発現:AN2にmycタグを導入して胚全体に発現させたところ、産物は基底膜に濃縮することがわかった。このことから、AN2は野性型の胚ではfloor plateの底の基底膜に濃縮して存在し、そこで何らかの機能を果たすことが示唆された。

我们旨在确定与神经网络构建有关的新分子，并分析斑马鱼的功能，斑马鱼是脊椎动物中最简单的中枢神经系统。鼻子（Kiyoken）和同事发现了AN34，这是一种在果蝇中表达的基因，在少数肌肉纤维中，与脊椎动物F-Spondin高度同源。 F-Spondin是一种分泌的蛋白质，该蛋白质在地板板上特别表达，已被证明可以在体外促进神经纤维延伸。我们试图将属于该家族的基因片段与斑马鱼分离，并期望发现同源性在神经纤维诱导中起着基本作用的区域。结果，可以隔离多个克隆（大约100 bp的片段）。今年的计划包括对这些基因组的结构分析，表达模式的分析以及初步的异位表达实验。（1）结构分析：确定了属于该家族的四个预测基因产物的总结构。其中两个是斑马鱼中认为是f子蛋白的分子，并且表现出与大鼠F-Spondin相似的结构（让我们为F-Spondin1和F-Spondin2）。另外两个彼此非常相似，并且在序列和结构上更相关的分子（AN1，AN2）。（2）表达模式：所有四个基因基本上均在地板板中表达。（3）异位表达：当将MYC标签引入AN2并在整个胚胎中表达时，发现该产物集中在基底膜中。这表明AN2集中在野生型胚胎的地板底部的基底膜中，并且在那里执行一些功能。