転写因子の発現によって規定される神経細胞の、機能的神経回路網中での位置づけ

功能神经网络中神经元的定位由转录因子的表达决定

基本信息

批准号：
16015322
负责人：
東島眞一
金额：
$ 1.73万
依托单位：
National Institutes of Natural Sciences Okazaki Research Facilities
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Chx10,Vsx1,Dbx1,Evx2遺伝子について、相同組み換えの方法でGFPを組み込んだBACコンストラクトを作製した。トランジエントアッセイを行いGFPの発現を調べたところ、Vsx1,Chx10,Dbx1についてポジティブな結果が得られた。Vsx1::GFPとChx10::GFPでは、GFP陽性細胞はともに同側下行性介在ニューロンから成り立っていた。どちらもグルタミン酸作動性であり、よく似た形態をもつ。よって、Vsx1陽性細胞とChx10陽性細胞は同一の細胞集団であると考えられる。mRNAの発現は、Vsx1はventricular zoneの細胞で一過的に見られ、Chx10はpost mitoticニューロンで見られる。したがって、Chx10陽性細胞はVsx1陽性の細胞から由来することが強く示唆される。Vsx1::GFPトランスジェニックフィッシュ(ゲノムに挿入されているもの)は作製済みであり、作製中のChx10::GFPトランスジェニックフィッシュと併せて、Vsx1/Chx10陽性ニューロンの回路中での役割を、電気生理学的な解析により調べる予定である。遊泳行動中に、同側の運動ニューロンの活動を直接制御する、いわゆるCPG(central pattern generator)ニューロンではないかと推測している。Dbx1::GFPのトランジエントアッセイでは、交叉型介在ニューロンがGFPでラベルされた。GFP陽性ニューロンはグルタミン酸作動性ニューロンとグリシン作動性ニューロンの双方を含み、予備的な解析では、Evx2遺伝子が、これらのうちグルタミン酸作動性ニューロンのみを特異的にマークするという結果を得ている。Evx2がDbx1陽性細胞から由来する細胞に関して、神経伝達物質の決定因子になっているかを調べる予定である。また、作製中のDbx1::GFPトランスジェニックフィッシュの作製後は、GFPを発現する細胞の、回路中での機能を電気生理学的に調べる予定である。興奮性と抑制性のニューロンが存在するが、抑制性ニューロンに関しては、体の動きの相反性抑制を制御するニューロンだと推測している。

通过同源重组，为CHX10，VSX1，DBX1和EVX2基因制备了包含GFP的BAC构建体。进行了瞬态测定以检查GFP表达，并获得了VSX1，CHX10和DBX1的阳性结果。在VSX1 :: GFP和CHX10 :: GFP中，两个GFP阳性细胞由同侧降序中间神经元组成。两者都是谷氨酸能，并且具有相似的形态。因此，据信VSX1和CHX10阳性细胞是相同的细胞群。在心室区域的细胞和有丝分裂后神经元中的CHX10中瞬时可见mRNA表达。因此，强烈建议CHX10阳性细胞源自VSX1阳性细胞。 VSX1 :: GFP转基因鱼类（插入基因组）已被产生，并与当前生产的CHX10 :: GFP转基因鱼一起，电路中VSX1/CHX10阳性神经元的作用将通过电生理学分析研究。据推测，它是一种所谓的中央模式发生器（CPG）神经元，在游泳行为过程中直接调节同侧运动神经元的活性。在DBX1 :: GFP的瞬时测定中，跨型中间神经元用GFP标记。 GFP阳性神经元均包含谷氨酸能和甘氨酸 - 凝胶神经元，而初步分析表明，EVX2基因仅特异性地标记了其中的谷氨酸能神经元。我们将研究EVX2是否是源自DBX1阳性细胞的细胞神经递质的决定因素。此外，在DBX1 :: GFP转基因鱼的产生之后，将在电生理学上检查电路中表达GFP细胞的功能。有兴奋性和抑制性神经元，但我们推测抑制性神经元是控制人体运动相互抑制的神经元。