ゼブラフィッシュ脊髄神経細胞多様性形成機構の包括的解析

斑马鱼脊髓神经元多样性形成机制的综合分析

基本信息

批准号：
17017043
负责人：
東島眞一
金额：
$ 3.2万
依托单位：
National Institutes of Natural Sciences Okazaki Research Facilities
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ゼブラフィッシュを用いて、脊髄神経細胞多様性形成の包括的な理解を目指すものである。研究方針は、(1)発生期に神経系の少数の細胞で発現する転写因子に関して、その陽牲細胞をトランスジェニックフィッシュの手法でGFPおよびDsRedで可視化し、(2)GFP陽性細胞がどのような神経細胞に分化していくかを形態学的に調べ、つぎに、色の異なったライン同士の掛け合わせにより、2つの異なった遺伝子に関して陽性細胞同士の関係を調べる、である。実際には、Chx10,Vsx1,nkx2.1,Lim1,Lim5,BarH1,Dbx1,gsh1,gata3,Sim1b,Evx2,atoh1a,pax6aについて解析を進めた。すべての遺伝子に関して、まず、BACにGFPを挿入したコンストラクトを作製した。そのうち、Evx2,Sim1b以外のものに関しては、期待される細胞群にGFPの発現が見られた。これらポジティブなものに関して、トランスジェニックフィッシュの作製を行い、Vsx1,Chx10,BarH1,Dbx1に関してはGFPトランスジェニックラインが得られた。また、Chx10に関してはDsRedラインも得られた。また、神経伝達物質に関する遺伝子に関してもトランスジェニックフィッシュの作製を進め、glyt2(グリシン作動性ニューロンで発現)、vglut2a(グルタミン酸作動性ニューロンで発現)についてトランスジェニックフィッシュが得られた。得られたラインのうち、詳しい解析はChx10を中心に行った。その結果、Chx100陽性細胞はすべて同側下行性神経細胞であり、またグルタミン酸作動性の興奮性神経細胞であることを明らかにした。他の転写因子との関係ではChx10陽性細胞はすべてVsx1陽性細胞に含まれることが明らかとなった。

这项研究旨在使用斑马鱼对脊柱神经元多样性的形成提供全面的理解。研究策略是（1）可视化在新生阶段使用GFP和DSRED在神经系统中少数细胞中表达的转录因子，并使用转基因鱼技术表达，（2）（2）在形态学上检查GFP阳性细胞分化的神经元的类型，然后通过跨越不同颜色的阳性基因之间的阳性细胞之间的关系，从而在形态上进行研究。实际上，对CHX10，VSX1，NKX2.1，LIM1，LIM5，BARH1，DBX1，GSH1，GSH1，GATA3，SIM1B，EVX2，ATOH1A和PAX6A进行了分析。对于所有基因，首先创建了将GFP插入BAC的构建体。其中，除EVX2和SIM1B以外的其他人，在预期的细胞群中观察到GFP表达。对于这些阳性，产生了转基因鱼，并为VSX1，CHX10，BARH1和DBX1获得了GFP转基因线。另外，对于CHX10，我们还获得了DSRED线。此外，还开发了有关与神经递质相关的基因的转基因鱼，并获得了用于甘氨酸（在甘氨酸 - 饮用神经元中）和vglut2a（在谷氨酸膜促性神经元中表达）的转基因鱼。在获得的线中，主要使用CHX10进行详细分析。结果，发现所有CHX100阳性细胞均为同侧降临神经元，是谷氨酸能兴奋性神经元。关于其他转录因子，发现所有CHX10阳性细胞都在VSX1阳性细胞中发现。