特定のクラスの神経細胞を不活化させることによる、脊髄神経回路機能の解析

通过灭活特定类别的神经元来分析脊髓神经回路功能

基本信息

批准号：
17021056
负责人：
東島眞一
金额：
$ 2.3万
依托单位：
National Institutes of Natural Sciences Okazaki Research Facilities
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ゼブラフィッシュの系を用いて、特定のクラスの神経細胞を不活化させることにより脊髄神経回路機能を解析することを目的としている。解析する対象としては、Chx10陽性細胞をとりあげた。研究代表者の研究により、Chx10陽性細胞は、逃避行動、遊泳行動、等において同側にある運動神経の活動を直接ドライブするニューロンである、ということを示す結果が得られてきている。Chx10陽性細胞を不活化することができれば、予想されているChx10陽性細胞の回路中での機能に対して、より強い証拠が得られると期待された。不活化させる手段としては、その神経細胞からのシナプス伝達を阻害するテタナス毒素を第一候補とした。テタナス毒素をGal4-UAS発現誘導システムを用いて、トランスジェニックフィッシュ同士の掛け合わせで、Chx10陽性細胞で強制発現させる、というものが研究方針である。Chx10に関して研究を進める前に、Gal4-UAS発現誘導システム、および、テタナス毒素がゼブラフィッシュでうまく働くかどうかを問うモデルケースとして、神経細胞全体で発現を促すHuCプロモーターのもとでGal4を発現するラインと、UASプロモーターのもとでテタナス毒素を発現するラインをまず作製した。それらを掛け合わせたところ、すべての神経細胞でテタナス毒素が発現し、全く動かない魚を得た。したがって、Gal4-UASシステムとテタナス毒素の双方ともうまく機能していることが示すことができた。現在、Chx10陽性細胞で、テタナス毒素を発現させるコンストラクトをもつトランスジェニックフィッシュを作製中である。

这项研究旨在通过使用斑马鱼系统灭活一类特定的神经元细胞来分析脊柱神经回路的功能。检查CHX10阳性细胞作为分析靶标。研究人员表明，CHX10阳性细胞是神经元直接驱动运动神经在逃生，游泳等同侧的活性。希望使CHX10阳性细胞失活的能力能够为CHX10阳性细胞在电路中的预期功能提供更强的证据。作为使产物失活的一种手段，抑制神经元突触传递的破伤风毒素是第一个候选者。该研究政策是通过使用GAL4-UAS表达诱导系统跨基因鱼类在CHX10阳性细胞中迫使破伤风毒素。在进行有关CHX10的研究之前，我们首先创建了一个GAL4-UAS表达感应系统和在HUC启动子下表达GAL4的线，该线刺激了神经元之间的表达，以及在UAS启动子下表达破伤风毒素的线，作为模型案例，以质疑Tetanus毒素在Zexbrafish中是否很好地起作用。当它们成倍增加时，所有神经细胞都表达了破伤风毒素，从而产生了完全固定的鱼。因此，GAL4-UAS系统和破伤风毒素都可以证明可以很好地发挥作用。目前，在CHX10阳性细胞中，通过表达破伤风毒素的构建体生产转基因鱼。