RNAポリメラーゼの金属をとりまく局所の構造と機能

RNA聚合酶中金属周围的局部结构和功能

• 批准号: 08249243
• 负责人: 石浜 明
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249243/
• 关键词: RNAポリメラーゼ; 転写因子; 転写シグナル; 生体金属; 鉄; DNA-蛋白質相互作用; 蛋白質-蛋白質相互作用; 転写制御

RNAポリメラーゼは、転写調節蛋白因子や、DNAの調節シグナルと相互作用をすることによって、転写対象の遺伝子の選択認識特性を変える。遺伝解析によって我々は、大腸菌RNAポリメラーゼ上に、各種の転写因子やDNA調節シグナルとの接点のマッピングを行った。蛋白-蛋白、蛋白-DNA接触の接点が示唆されたが、変異にともなう間接的影響を排除できない。そこで、分子間接触の直接的証明を得る目的で、Fe-BABE(p-Bromoacetamidobenzyl-EDTA)をシステイン残基特異的に導入し、還元剤添加によって鉄原子から発生したラジカルによる、至近距離の蛋白質や核酸の主鎖切断点を同定することによって、接触点を決定する試みを実施した。クラス1転写因子、DNAエンハンサーの接点が推定されていたアルファサブユニットC端ドメインの1個所にだけFe-BABEを結合させ、修飾サブユニットからRNAポリメラーゼを再構成して、DNAとの相互作用を調べたところ、先にエンハンサーと推定していた場所だけが、切断を受け、アルファサブニットのDNA上の接点が同定できた。しかも、2分子のアルファサブユニットの一方にだけFe-BABEを導入する、画期的方策を確立し、それぞれのアルファサブユニットのDNA上の接点を別々に同定することが出来た。本研究のよって、転写制御の分子機構の新たな突破口を切り開くことが出来た。

RNA regulatory factors, DNA regulatory factors, interactions, and selective cognitive properties of RNA regulatory proteins DNA analysis, RNA sequencing, DNA regulation, DNA sequencing Protein-protein, protein-DNA contact points are indicated, and indirect effects are excluded. For the purpose of direct demonstration of molecular contact, residue-specific introduction of Fe-BABE(p-Bromoacetamidobenzyl-EDTA), addition of reducing agent, generation of iron atom, identification of main lock cleavage point of protein and nucleic acid at close range, and determination of contact point were carried out. 1. DNA binding factor, DNA binding factor, DNA binding factor, The method of introducing Fe-BABE into the DNA of the two molecules was established and the method of identifying the contacts on the DNA of the two molecules was established. This study is a new breakthrough in the molecular mechanism of molecular biology.

项目成果

Jishage,M.: "Variation in RNA polymerase sigma subunit composition within different stocks Escherichiacoli strain W3110." J.Bacteriol.179・3. 959-963 (1997)

Jishage, M.：“不同种大肠杆菌菌株 W3110 中 RNA 聚合酶 sigma 亚基组成的变化。J.Bacteriol.179·3 (1997)”

Imamura,R.: "Identification of the cdpA gene encoding cyclic 3′,5′-adenosine phosophate phosphodiesterase in Escherichiacoli." J.Biol.Chem.271・41. 25423-25429 (1996)

Imamura, R.：“大肠杆菌中编码环状 3,5-腺苷磷酸二酯酶的 cdpA 基因的鉴定。J.Biol.Chem.271·41 (1996)。

Negre,D.: "DNA flexibility of the UP element is a major determinant for transcriptional activation at the Escherichiacoli aoetate promoter." Nucleic Acids Res.25・4. 713-718 (1997)

Negre, D.：“UP 元件的 DNA 灵活性是大肠杆菌 aoetate 启动子转录激活的主要决定因素。” 核酸研究 25・4 (1997)。

Belyaeva,T.: "Location of the C-terminal domain of the RNA polymerase alpha subunit in diggerent open complexes at the Escherichiacoli galactose operon regulatory region." Nucleic Acids Res.24・12. 2243-2251 (1996)

Belyaeva, T.：“大肠杆菌半乳糖操纵子调控区挖掘复合物中 RNA 聚合酶 α 亚基的 C 末端结构域的位置。” 核酸研究 24·12 (1996)。

Eichenberger,P.: "The influence of the location of the activator binding site on the geometry of a transcriptional activation the geometry of a transcriptional activation complex in Eschericiacoli." Biochemistry. 35・48. 15302-15312 (1996)

Eichenberger, P.：“生物化学中激活剂结合位点的位置对转录激活复合物的几何形状的影响”，15302-15312。