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新人為起源有害物質のマウス生殖細胞への影響

新型人为有毒物质对小鼠生殖细胞的影响

基本信息

批准号：
08255250
负责人：
井上雅雄
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

以下の実験に用いたマウスはC3H/Heの雌(10-16週令)で、新人為起源有害物質のダイオキシンは2,3,7,8-Tetrachloro didenzo-p-dioxin(TCDD)であった。1)TCDD処理による卵子の不定期DNA合成(UDS)の検出:in vivoの実験として、TCDDを雌マウス腹腔に投与した後、卵巣から酵素を用いて卵を採取し、^3H-thymidine(1.85MBq/ml)を含む培養液中で3時間培養した後、低張・固定後、卵の標本を作成した。卵標本のTCA処理後、オートラジオグラフィー処理を行い、染色後、銀粒子数を計測した。in vitroの実験は、採取した無処理のマウスの卵を^3H-thymidine培養前にTCDD存在下で1時間処理した。以下の方法は上と同じであった。その結果、カウンターパートに用いたMMSやENUは、in vivo,in vitro処理にかかわらず、キアズマ染色体(MI)上でUDSが検出できた。しかし、TCDD処理群では、in vivo,in vitro処理の両方とも、UDSは検出できなかった。2)TCDD処理による卵子の染色体異常の検出:TCDDを雌マウス腹腔に投与した後、卵巣から酵素を用いて卵を採取し、コルヒチンを含む培養液中で3時間培養した後、低張・固定後、卵の標本を作成した。卵標本の染色後、顕微鏡下で主にキアズマ染色体(MI)を分析した。その結果、カウンターパートに用いたMMSの100mg/kg投与群は、約30%ほどの異常染色体を有する卵が検出され、その異常のタイプは、GapやExchangeが多かった。TCDDの100μg/kg投与群においても約20%ほどの異常染色体を有する卵が検出され、その異常のタイプはMMSと異なりGapやExchageは検出されず、数異常(aneuploidy)がほとんどであった。さらに検討が必要である。

C3H/He female (10-16 weeks old), new origin harmful substance 2,3,7,8-Tetrachloro dibenzo-p-dioxin(TCDD). 1) Detection of unscheduled DNA synthesis (UDS) in eggs treated with TCDD:in vivo, after administration of TCDD to the abdominal cavity, after application of enzyme in eggs, after collection of eggs,^3H-thymidine (1.85MBq/ml) in culture medium for 3 days, after hypotonicity and fixation, after preparation of eggs. After TCA treatment, the number of silver particles was measured. In vitro, the eggs were treated with TCDD for 1 time before incubation with H-thymidine The following methods are used to describe the situation. The result is that the chromosome (MI) can be detected by MMS ENU, in vivo,in vitro. TCDD, in vivo,in vitro, UDS 2) Chromosome abnormality detection of eggs after TCDD treatment: After TCDD was injected into the abdominal cavity, the eggs were collected with enzymes, and the eggs were cultured in culture medium for 3 hours. After hypotony and fixation, the eggs were prepared. The chromosome (MI) was analyzed under microscope. The results showed that when MMS was administered at 100mg/kg, abnormal chromosomes were detected in about 30% of the cases, and abnormal chromosomes were detected in all cases. TCDD at 100μg/kg was administered to about 20% of the population with abnormal chromosomes, gaps and exchages. This is the day when the search is necessary.